卢志宏

（铜仁学院，贵州铜仁 554300）

铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）为兰科（Orchidaceae）石斛属（Dendrobium）珍稀植物［1-3］，《神农本草经》将其列为上品［4］，位列中华九大仙草的首位［5］，2010年版《中国药典》称其具有益胃生津、清热滋阴等作用［6］。现代药理学实验证明，铁皮石斛含有多糖、生物碱、氨基酸等成分，临床上用来治疗肿瘤、提高机体免疫能力等［7］，应用广泛。

铁皮石斛主要分布于我国秦岭和长江流域以南地区，生长在树干或石缝中［8］，靠侧芽分蘖进行无性繁殖，有性繁殖主要依靠昆虫传粉，成功率极低。野生资源资源十分有限，加之市场价值高，造成了无限制的掠夺性采摘，野生资源濒临灭绝，已被我国列为2级保护植物［3］。为了有效保护铁皮石斛的野生资源，实现可持续发展，我国科技工作者进行了大量的人工授粉及组培快繁技术工作，实现了铁皮石斛种苗的工厂化繁育。

本文从石斛花期（疏花）、花粉生活力、人工授粉、种子质量等4个方面介绍了铁皮石斛结实特性，以及种子组培技术，旨在为铁皮石斛种植和繁育工作提供参考。

1 花期和疏花

何平荣等通过观察丹霞地貌下铁皮石斛的花芽、花蕾和花被片的发育特征，划分为萌芽、现蕾、初花、盛花和枯萎等5个时期，时间分别为15～18d、20～25d、1～2d、8～12d和2～3d［9］。初花期少数在5月上旬，多数为6月上旬；盛花期一般集中6月中上旬，7月结束花期［10］。

疏花是一项典型的农艺措施，将开花密集枝条上的花朵摘除。铁皮石斛授粉前摘除弱小、有虫害的花朵，每个枝条一般保留3朵以下为宜，疏花可以降低营养损耗，便于操作［3］，保证授粉后蒴果健康成长，提高种子质量。

2 花粉生活力

铁皮石斛为典型的唇型花，呈总状花序，花苞片干膜质，呈卵形；花瓣与萼片黄绿色，长圆状披针形，1枚异化为唇瓣，白色。雌雄蕊合体，雌蕊位于下方，雄蕊在上方，分为柱头窝和药室。花粉粒呈乳黄色水滴状，共四粒，两两构成花粉块，药帽覆盖于药室上方［10-11］。

测定石斛花粉活力的常用方法有氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法、过氧化物酶法和碘-碘化钾染色法测定花粉活力。TTC染色法是将石斛的花粉染色［12］，37℃黑暗环境下培养14h，100倍显微镜下观察统计染色花粉数量。过氧化物酶法是配制取甲乙2种试剂，试剂甲是由联苯胺、α-萘酚和碳酸钠组成的乙醇溶液，试剂乙是过氧化氢水溶液，花粉上滴试剂甲和试剂乙各1滴，涂匀，压片，3～4min后观察和统计，呈红色或玫瑰色为有活力花粉。李永清等认为不同品种石斛花粉染色时间不同，部分30min后变红，大部分14h后效果较好，铁皮石斛染色率在70%［12］，朱波等认为有活力花粉在花蕾期的比例为29.4%，开花当天高达70.6%，7d后为31.9%，甚至花谢仍有活力［4］。

3 人工授粉

目前，铁皮石斛采用的授粉方式一般分为自花授粉和异花授粉，后者根据花粉来源不同又可以分为3种，即同株异花授粉、异株授粉和种质间授粉。授粉时，先去掉母本唇瓣及药帽内的花粉，用镊子去掉父本的唇瓣，摘除药帽后可看到4个黄色花粉团，将花粉团送到母本柱头内，即完成人工授粉［13］。

3.1 人工授粉方式 自花授粉是指将花粉块送到同一花朵的柱头，同株异花授粉指将同一枝条一朵花的花粉送到另一朵花的柱头，种质内异株授粉送到其他花朵柱头，种质间授粉指不同种质间进行的人工授粉。一般2个星期后统计成功率和座果率。王聪等通过对46个不同种子资源的铁皮石斛人工杂交授粉实验的观察，发现授粉成功率和座果率在不同种质间最高，自花授粉的最低［14］。李景蕻等认为异花授粉成功率显著高于自花授粉，人工授粉显著提高了授粉成功率［3］。朱波等对213朵花朵进行了人工杂交授粉，结实率为82.6%；对165朵花朵进行了人工自交，结实率为7.3%；温室内自由授粉326朵花，野外观察昆虫传粉156朵花，结实率均为0；认为人工授粉有助于提高铁皮石斛授粉率［4］。

3.2 授粉时间 未完成授粉的花朵，2～3d就会枯萎凋落，而成功授粉的子房逐渐膨大，花瓣逐渐萎蔫，7d左右可以观察到浅绿色果实的雏形，21d左右可以进行疏果处理，每个枝条上保留2～3个稍大的果实［3］。李景蕻等发现自花授粉在4d内均能结实，第3d结实率最高，达到30%，第5d为0；异花授粉在5d内均能结实，第3天结实率最高，可达到90%；无论是自花授粉还是异花授粉，最佳授粉时间均是开花后的第2～3天［3］。王怀青通过实验也获得了类似的结果，第3天异花授粉成功率为87.5%［13］。

3.3 授粉粘附助剂 使用粘附助剂可以提高铁皮石斛人工辅助授粉的成功率，粘附助剂将花粉润湿后，提高了授粉工具粘附花粉块的能力，可以极大地大提高工作效率。何玉友等应用75%的酒精和水作为粘附助剂，授粉成功率分别为92.46%和90.11%［15］。

4 种子

在普通光学显微镜下，铁皮石斛种子为黄绿色，两端具翅，长约0.2mm，直径约0.04mm［11］。充分成熟的种子，在切开蒴果后呈粉末分散装，而欠成熟的种子在切开蒴果后呈黏连的块状［16］。

不同部位花朵授粉是指花朵在铁皮石斛枝条着生的位置，可以分为稍部（顶端）、中部和基部3个位置。王怀青在授粉30d后，发现稍部、中部和基部铁皮石斛蒴果数量、重量差异不显著，但是稍部数量较高，基部重量较高［13］。

李景蕻等指出种龄为60、90、120、150、180、210d的种子接入培养基均可以发芽，60d种龄的种子约需28d，90d种龄的约14d，120d种龄以上的约7d，且萌发率超过90%［3］。付传明等指出，采用种子→原球茎→完整植株→移栽进行种子组培，可以实现铁皮石斛种苗的工厂化繁殖［17］。

5 小结

铁皮石斛是我国传统的药用植物，历史上由于地域和药效的原因，药用石斛的原植物种类较多，不同医学典籍上记录存在差异，但均为兰科石斛属植物，不同种类的石斛其有效成分存在差异，即使是同一种石斛，因产地的不同，品质也不同；而随着市场对石斛需求量的增加，野生石斛资源被大量毁灭性的采掘，导致我国石斛种质资源面临前所未有的挑战。另外，随着中药材规范化生产的市场需求，规范铁皮石斛种质资源和实现规模化生产成为现实。目前，铁皮石斛已经实现了种质资源的规范，规划化种植已经成为了现实，应用铁皮石斛种子工厂化组培育苗已投入了实际生产。