车 佳

白藜芦醇对TRAIL耐药HT29细胞的干预作用及机制研究

车 佳

目的 探讨白藜芦醇是否能提高耐药结直肠癌细胞对TRAIL的敏感性并研究其机制。方法 将TRAIL耐药HT29细胞（TR-HT29细胞）按对照组、白藜芦醇组、TRAIL组、白藜芦醇+TRAIL组及白藜芦醇+TRAIL+HAX-1质粒组进行分组后，CCK-8法检测TR-HT29细胞活力，流式细胞术检测TR-HT29细胞的凋亡程度和线粒体膜电位，Western blot实验检测TR-HT29细胞HAX-1表达水平、细胞色素C的释放和Caspase-3的活化。结果 TR-HT29细胞对TRAIL的半数有效浓度（IC50）（19.4±1.3）ng/mL 显著高于 HT29 细胞的（1.8±0.2）ng/mL，（P＜0.05）。白藜芦醇处理可显著抑制TR-HT29细胞HAX-1蛋白的表达水平。白藜芦醇+TRAIL组TR-HT29的细胞活力抑制率（53.6±4.4）%，凋亡诱导率（39.4±2.9）%，显著高于TRAIL组的细胞活力抑制率[（14.3±1.0）%，P＜0.05]、凋亡诱导率[（9.6±0.7）%，P＜0.05]和白藜芦醇+TRAIL+HAX-1质粒组的细胞活力抑制率[（19.9±1.5）%，P＜0.05]、凋亡诱导率[（13.8±1.1）%，P＜0.05]。白藜芦醇+TRAIL组TR-HT29的线粒体膜电位显著低于TRAIL组和白藜芦醇+TRAIL+HAX-1质粒组。白藜芦醇+TRAIL组TR-HT29细胞色素C的释放和Caspase-3的活化显著高于TRAIL组和白藜芦醇+TRAIL+HAX-1质粒组。结论白藜芦醇通过下调HAX-1表达提高耐药结直肠癌细胞对TRAIL的敏感性。

结直肠癌；TRAIL；白藜芦醇；HAX-1；凋亡

TNF相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis- inducing ligand，TRAIL）是一种由巨噬细胞分泌的细胞因子，能选择性地诱导肿瘤细胞发生凋亡而不影响正常细胞的功能，因此TRAIL是一种很有前景的抗肿瘤药物[1]。然而肿瘤细胞对TRAIL的获得性耐药严重降低了它的抗肿瘤疗效[2]。本研究的目的在于探讨白藜芦醇是否能提高耐药结直肠癌细胞对TRAIL的敏感性并研究其机制。

1 实验材料

1.1 试 剂 TRAIL（批号P50591）购于美国Ramp;D system公司。白藜芦醇（批号R5010）、细胞计数试剂盒-8（Cell Counting Kit-8，CCK-8，批号 96992）、凋亡检测试剂盒（批号APOAF）购于美国Sigma-Aldrich。HCLS1 相关蛋……