方 琦 庞恩桥 韦宜峰 王丽祥

(广西柳州市柳铁中心医院耳鼻喉科，柳州市 545007)

鼻咽癌分化程度与CD80和CD86表达的相关性研究

方 琦 庞恩桥 韦宜峰 王丽祥

(广西柳州市柳铁中心医院耳鼻喉科，柳州市 545007)

目的研究CD80和CD86在鼻咽癌中的表达及其生物学意义。方法应用免疫组织化学染色法检测26例鼻咽癌组织(低分化13例，未分化13例)和11例正常鼻咽组织中CD80和CD86的表达水平。结果鼻咽癌组织和正常鼻咽组织的CD80和CD86阳性率分别为61.54%(16/26)和100.00%(11/11) ，阳性组织用PISA-2000图像分析，测得其不同的平均阳性灰度值AGV：CD80为(41.53±5.81)、(73.93 ±6.45) ；CD86为(42.44±4.12)、(73.60±6.42)，两者比较，差异有统计学意义(Plt;0. 05)。低分化鼻咽癌组织和未分化鼻咽癌组织CD80和CD86的阳性率分别为84.62%(11/13)和38.46% (5/13)(Plt;0.05)。结论CD80和CD86在鼻咽癌组织中的表达明显低于正常组织，表达主要在细胞质和细胞核内，随分化程度下降而下降。

鼻咽癌；CD80；CD86

CD80和CD86是表达在抗原提呈细胞(APC)上的重要协同刺激分子,激活特异性的T细胞时，与T细胞上的CD28分子结合，发挥免疫效应。近年来的研究表明，非小细胞肺癌、卵巢癌、肝癌、肾细胞癌、食管癌以及宫颈癌组织中CD80(B7-1)和CD86(B7-2)的表达明显低于正常组织，发生肿瘤细胞免疫逃避。 为进一步探讨CD80和CD86在鼻咽癌中的表达及其生物学意义，我们应用免疫组织化学染色技术检测了26例鼻咽活检的鼻咽癌组织(低分化13例，未分化13例)及11例鼻咽正常组织标本中CD80和CD86的表达水平，报告如下。

1 材料和方法

1.1 材料 鼻咽癌标本26例、正常鼻咽组织标本11例均取自柳州市柳铁中心医院2012年至2015 年就诊患者的鼻咽活检组织，并经病理学确诊。CD80和CD86单克隆抗体均为武汉博士德生物有限公司产品。

1.2 方法 组织标本经福尔马林固定，脱水，常规石蜡包埋，制备成3 μm厚连续切片，石蜡切片常规脱蜡至水后PBS振洗，按博士德APA免疫组织化学检测试剂盒说明书染色。抗CD80单抗与抗CD86单抗浓度，CD80 ∶蒸馏水1 ∶1 000；CD86 ∶蒸馏水1 ∶400。石蜡切片经Bench Mark XT全自动免疫组(IHC)独立温控液体封盖膜法处理后在光镜下观察。

1.3 结果判断 以胞质或细胞核中出现棕色颗粒或均一棕色为阳性。无阳性细胞记为-， 有阳性细胞记为+。 图像分析：每张切片随机录入5个视野图像， 测定视野内的阳性细胞阳性产物强度，用PISA-2000图像分析，以平均阳性物质灰度值表示，将5个视野的阳性灰度平均值作为每一张片的平均阳性物灰度值AGV, AGV越大阳性反应物的染色强度越大。

1.4 统计学处理 采用SPSS 19.00统计学软件处理数据，计数资料以%表示，组间率的比较采用χ2检验,计量数据以(x±s)表示，组间比较应用t检验，Plt;0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 染色强度表达情况 正常鼻咽组织中CD80、CD86阳性率高于鼻咽组织(Plt;0.05)；鼻咽癌组织CD80平均阳性物灰度值AGV、CD86平均阳性物灰度值AGV均低于正常鼻咽组织(Plt;0.01)。详见表1。

表1 鼻咽癌标本及正常鼻咽组织中CD80 、CD86的表达

2.2 免疫组化染色 鼻咽癌组织CD80、CD86的免疫组化染色，其表达主要在细胞质和细胞核内。详见图1、图2。

图1 未分化鼻咽癌CD80表达(×400)

图2未分化鼻咽癌CD86表达(×400)

2.3 阳性频度表达情况 低分化鼻咽癌组织中CD80、CD86阳性明显高于未分化鼻咽癌(Plt;0.05)。见表2。

表2 低分化、未分化鼻咽癌组织中CD80、CD86的表达

3 讨 论

CD80和CD86均为跨膜糖蛋白,是免疫球蛋白超家族(immunoglobulins supeffamily，IgSF)成员, 以寡聚体形式表达于大多数APC表面,如树突状细胞(dendritic cell，DC)、活化的T细胞、B细胞以及巨噬细胞等[1-2]。在人体的抗肿瘤免疫机制中，T淋巴细胞介导的细胞免疫是主要方式。初始T淋巴细胞的活化既需要由T淋巴细胞抗原受体(TCR)与抗原提呈细胞(APC)上的抗原肽-主要组织相容性复合体(MHC)结合提供的第一信号，又需要由APC上的协同刺激分子与T淋巴细胞上的相应配体结合提供的第二信号协同刺激[3]。 CD80、CD86在组织中的表达 ,主要由T细胞上的CD28与抗原提呈细胞(APC)上的 CD80(B7-1)和CD86(B7-2)结合所提供。[4]大多数肿瘤细胞表达MHC-I类分子和肿瘤抗原，是潜在的APC;然而，研究表明,如肾细胞癌[5]、小细胞肺癌[6]、卵巢癌[7]、肝癌组织中[8]CD80和CD86在癌组织中的表达明显低于癌周组织和正常组织。表明B7在肿瘤的不表达是其逃避杀伤性 T 淋巴细胞(CTL)的攻击,是恶性增殖的主要机制[9]。我们应用免疫组织化学染色技术检测鼻咽癌组织及鼻咽正常组织标本CD80和CD86的表达水平，发现CD80和CD86在鼻咽癌组织和正常组织的表达率为38.46%、100%。CD80和CD86阳性表达用图像分析测得正常组织、鼻咽癌组织其不同的平均阳性灰度值(AGV)分别为(41.53±5.81)、(73.93±6.45)和(42.44±4.12)、(73.60±6.42)。鼻咽癌组织和正常组织的表达差别有统计学意义。结果鼻咽癌组织中的表达明显低于正常组织，表达主要在细胞质和细胞核内。证实鼻咽癌细胞并不是没有合成CD80和CD86分子的功能，只是CD80和CD86在细胞中的表达明显减少，且不能表达在细胞膜上,鼻咽癌细胞内可能存在CD80和CD86分子运送至细胞膜上有缺陷,造成协同刺激分子缺乏，致使鼻咽癌癌细胞逃避杀伤性T淋巴细胞(CTL)的攻击,恶性增殖。是否可通过运用于鼻咽癌的免疫治疗，减少肿瘤细胞这种逃避能力。黄光武等[10]通过对鼻咽癌病人外周血树突状细胞的表型及功能检测，初步显示从鼻咽癌患者的外周血分离出的DC，通过体外的诱导分化，是可以培养成熟，具有较强呈递抗原能力的。这为今后DC运用于鼻咽癌的免疫治疗提供一个新的方向。

有研究证实，在甲状腺癌中CD80和CD86的表达随病变程度进行性下降[11]。本组研究发现鼻咽低分化组织和鼻咽未分化组织CD80和CD86表达的阳性率为84.62%(11/13)和38.46%(5/13)，鼻咽癌CD80和CD86表达差异有统计学意义，提示鼻咽癌CD80和CD86表达随分化程度下降而下降。

综上所述，鼻咽癌组织中CD80、CD86的共刺激分子低下，随分化程度下降而下降，至肿瘤细胞逃避机体的免疫攻击，恶性增殖。这为今后可通过大样本鼻咽癌组织中的CD80和CD86表达受损研究，探索与临床病理分型及预后的关系，提供了一个参考。

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CorrelationofnasopharyngealcarcinomadifferentiationwithCD80andCD86expressions

FANGQi,PANGEnqiao,WEIYifeng,WANGLixiang

(DepartmentofOtorhinolaryngological，LiuzhouMumicipalLiutieContralHospital，Liuzhou，Guangxi545007，China)

ObjectiveTo investigate the expressions and biological significance of CD80 and CD86 in nasopharyngeal carcinoma.MethodsThe expressions of CD80 and CD86 were detected by immunohistochemical stain in 26 cases of nasopharyngeal carcinoma tissues(including 13 poorly differentiated cases and 13 undifferentiated cases) and 11 cases of normal nasopharyngeal tissues.ResultsThe positive rates of CD80 and CD86 in the nasopharyngeal carcinoma tissues and normal nasopharyngeal tissues were 61.54%(16/26) and 100.00%(11/11) respectively. The average grey values (AGV) of CD80 in the positive nasopharyngeal carcinoma tissues and normal nasopharyngeal tissues were (41.53±5.81)and (73.93 ±6.45)respectively. According to the analysis of PISA-2000 images, the average grey values (AGV) of CD80 in the positive nasopharyngeal carcinoma tissues and normal nasopharyngeal tissues were(41.53±5.81)and (73.93±6.45)respectively. The AGVs of CD86 in the positive nasopharyngeal carcinoma tissues and normal nasopharyngeal tissues were(42.44±4.12)and(73.60±6.42)respectively. And significant differences in the AGVs were found between the two groups(Plt;0.05).The positive rates of CD80 and CD86 in the poorly differentiated tissues and undifferentiated tissues were 84.61%(11/13)and 38.46% (5/13)respectively(Plt;0.05).ConclusionThe expressions of CD80 and CD86 in the cancer tissues are lower than those in the normal tissue. CD80 and CD86 mainly expressed in cytoplasm and nucleus, and their expressions decreased with the decrease of differentiation.

Nasopharyngeal carcinoma;CD80;CD86

R 739.6

A

1673-6575(2016)05-03

10.11864/j.issn.1673.2017.05.03

2017-06-24

2017-08-18)