周汝顺，江 燕 ，李四元

（1.湖南省兽药饲料监察所，湖南长沙410006；2.湖南农业大学动物科技学院，湖南长沙410128）

黄藤素注射液含量测定方法的比较

周汝顺1，江 燕1，李四元2※

（1.湖南省兽药饲料监察所，湖南长沙410006；2.湖南农业大学动物科技学院，湖南长沙410128）

为建立HPLC法测定黄藤素注射液中盐酸棕榈碱的含量，并对其方法进行评价试验，HPLC法用盐酸巴马汀为对照品，以十八烷基健合硅胶为填充剂，以乙腈－0.4%磷酸溶液（34∶66）为流动相，柱温为30℃，检测波长为345nm，外标法计算结果另乘以1.136即得盐酸棕榈碱的含量。对HPLC法与原标准化学沉淀法在重复性、回收率、样品结果测定方面分别进行比较，二者在样品结果测定上无显著性差异，但HPLC法重复性更好，回收率更高，且操作简便，省时，可作为黄藤素注射液含量测定的一种补充方法，亦可为该标准的质量修订提供参考依据。

黄藤素注射液；含量测定；HPLC法；化学沉淀法

黄藤素注射液为防己科植物黄藤提取物制成的中药单体制剂，主要成分为黄藤素。本品主要功能为清热解毒，用于细菌性痢疾，肠炎，呼吸道及泌尿道感染等，具有抑菌、抗炎、抗病毒作用、明显增加白细胞吞噬细菌的多重药理作用和增强机体免疫力作用[1-2]，现已被载入《中国药典》[3]。本品作为兽用中药制剂亦已被农业部收入《兽药国家标准汇编》第二册[4]，即农业部第1506号公告。黄藤素又名盐酸巴马汀，亦叫盐酸棕榈碱，为异喹啉类生物碱，可与碘化铋钾、三硝基苯酚等试剂发生化学反应生成沉淀。因此在《农业部第1506号公告》黄藤素注射液质量标准中，其含量测定方法为化学沉淀法，但该方法操作过程繁琐，耗时长，回收率低，重复性差。因此本试验建立了H PLC法测定黄藤素注射液中盐酸棕榈碱的含量为该制剂的质量标准进一步修订提供依据[5]。

1 仪器与试剂

Agi l ent1200高效液相色谱仪（含四元梯度泵，紫外检测器，自动进样器，柱温箱，色谱工作站）,AL204分析天平（梅特勒公司，0.0001g）,202型电热恒温干燥箱（北京永光明医疗仪器公司，0.1℃）。盐酸巴马汀对照品（中国食品药品检定研究院，批号为0732-200005，含量≥98.0%）；黄藤素注射液（湖南广安动物保健品有限公司，湖南伟达生物科技有限公司，长沙新起点保健品有限公司）；乙腈为色谱纯；水为自制超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Agi l ent TC-C18柱（4.6m m×250m m,5μm）；流动相：乙腈－0.4% 磷酸溶液（34∶66）；流速：1.0m L/m i n；检测波长：345nm；进样量：10μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取盐酸巴马汀对照品适量，精密称定，加1%盐酸甲醇溶液制成每1m L含40ug的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

精密量取本品5m L，置50m L量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液定容至刻度，摇匀，精密量取1m L置25m L量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液定容至刻度，摇匀，即得。

2.3 结果的计算

本法用外标法计算结果，结果乘以1.136即得盐酸棕榈碱的含量。

2.4 对照方法含量测定（化学沉淀法）

参照《农业部第1506号公告》黄藤素注射液[含量测定]项下方法，精密量取本品20m L，置烧杯中，加水75m L与盐酸溶液（0.1m ol/L）5m L，在不断搅拌下缓缓加入三硝基苯酚试液30m L，放置2小时以上，用100℃恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀用上述滤液洗涤，再用水15m L洗涤，并在100℃干燥至恒重。精密称定，与0.7612相乘，即得供试品中含有盐酸棕榈碱（C21H 21NO4·H Cl·3H 2O）的重量。

3 结果

3.1 重复性试验

分别照上述两种含量测定方法取同一批号（20120701）的供试品5份测定含量。结果化学沉淀法测得样品平均含量为 9.53m g/m L，RSD=3.9%（n=5）；H PLC法测得样品平均含量为 9.71m g，RSD=0.3%（n=5）。见表 1。

2.3 回收率试验

取不同批号黄藤素原粉2份，测定含量，按黄藤素注射液生产工艺制成制剂，分别照上述两种含量测定方法制备并测定含量。计算回收率，结果化学沉淀法测得样品平均回收率为96.0%，RSD＝1.8%（n＝4）；H PLC法测得样品平均回收率为99.4% ，RSD＝0.5%（n＝4）。见表 2。

2.4 样品结果

取不同厂家、不同批次的样品，分别照上述两种含量测定方法制备并测定含量，结果见表3。

表1 方法的重复性比较

表2 方法的回收率比较

表3 样品含量测定结果比较

4 分析与讨论

4.1 重复性和回收率的比较

两种方法重复性和回收率的比较，H PLC法均明显好于化学沉淀法。主要原因是H PLC法样品处理较为简单，仪器进样精密度高。而化学沉淀法中影响沉淀完全的因素较多，三硝基苯酚试剂加入的速度、溶液PH值和温度对沉淀的形成均会产生较大的影响[6]，过滤后冲洗沉淀用水的体积和次数对沉淀的重量也有一定的影响。因此化学沉淀法重复性较差，结果的准确性难于控制。而化学沉淀法回收率较低，可能是由于沉淀不完全或是用水冲洗后导致部分沉淀溶解所致。

4.2 测定结果的评价

通过对多批次的样品测定结果比较，H PLC法测定的结果普遍较化学沉淀法高，但结果差异不显著。说明这两种方法对黄藤素注射液含量测定结果的评价基本一致，均可以作为含量测定的方法。

4.3 HPLC法条件的筛选

通过对不同色谱柱型号，柱温，流动相比例、流速的比较，本方法最终确定色谱柱为普通C18柱，流动相为乙腈－0.4%磷酸溶液（34：66），柱温为30℃，流速为1m L/m i n。在该条件下样品峰型较对称，无拖尾现象，理论塔板数高，杂质峰及溶剂峰对样品峰无干扰。

4.4 黄藤素注射液标准中含量以盐酸棕榈碱 （C21H21NO·4HC·l3H2O）计，盐酸棕榈碱跟对照品盐酸巴马汀的分子量比值为1.136，因此最后结果需乘以1.136。

5 结论

综合比较黄藤素注射液含量测定的这两种方法，H PLC法与化学沉淀法在含量测定结果方面无显著性差别，且化学沉淀法对仪器设备要求没那么高，检测成本相对较低，结果更容易得到；但H PLC法操作更简便，耗时少，数据相对准确，重复性好，可作为一种补充方法来测定黄藤素注射液中盐酸棕榈碱的含量，亦可为该标准的质量修订提供参考依据。

[1]孙高磊,王湘妍.HPLC法测定黄藤素中盐酸巴马汀的含量及有关物质[J]广州化工，2010，38(8).25-27.

[2]张慧，王义明，谢媛媛,等，HPLC法同时测定黄藤素注射液中黄藤素和盐酸药根碱的含量[J].中国药房2012，23(7):625-627.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社,2015.

[4]农业部兽药评审中心.兽药国家标准汇编[M].北京：中国农业出版社，2011.

[5]陈启友，周汝顺，匡光伟.HPLC法测定黄藤素注射液中黄藤素的含量[J].广东兽药，2012,29（5）：26-28.

[6]霍留拴,娄建新.重量分析法测定影响沉淀完全的因素[J].科技与生活,2012,（16）：116.

S859；R284.1

A

1006-4907（2017）05-0036-02

10.3969/j.issn.1006-4907.2017.05.017

周汝顺（1984～），男，瑶族，湖南怀化人，兽医师，农业推广硕士，主要从事兽药、饲料、畜禽产品检测技术研究，33401919@qq.com。

※通讯作者：李四元。

2017-10-20