刘 彬 毕鸿艳 张凌峰 杨秋萍 龙 娟 黄亚利 任 惠※

作者单位：1.昆明医科大学第一附属医院 老年神经内科 6500322.昆明医科大学第一附属医院 老年内分泌科 6500323.昆明医科大学神经内科专科研究生 650032

老年人群中AD7c-NTP检测的意义

刘 彬1毕鸿艳2张凌峰1杨秋萍2龙 娟1黄亚利3任 惠1※

作者单位：1.昆明医科大学第一附属医院 老年神经内科 6500322.昆明医科大学第一附属医院 老年内分泌科 6500323.昆明医科大学神经内科专科研究生 650032

目的研究在高原地区老年人群中进行尿中阿尔茨海默病(AD)相关的神经丝蛋白(AD7c-NTP)含量检测，对AD的早期诊断价值。方法采用ELISA检测40例AD和50例智能正常老年人尿中AD7c-NTP含量。结果AD组和正常对照组尿中AD7c-NTP的含量分别为2.78±0.72ng/ml和0.96±0.45ng/ml，AD组尿液中AD7c-NTP的含量明显高于正常对照组(P<0.01)；中重度AD组尿液中AD7c-NTP的含量明显高于轻度AD组(P<0.01)。结论在高原地区应用对疑似患者尿液中AD7c-NTP的含量检测，对AD的早期诊断和AD严重程度的评估是有显著价值的。

AD7c-NTP 阿尔茨海默病

我国目前有老年性痴呆(阿尔茨海默病，AD)患者约700万人，且每年约新增30万人，痴呆基数较大，不仅危害人民健康和生活质量，也给国家及患者家庭带来严重的经济和社会负担。患者常常出现明显认知功能异常时才引起家属的重视，由家属带来医院神经科或精神科就诊，此时往往已经为中晚期，治疗效果不明显。因此，对痴呆进行早期、正确的诊断、干预治疗，是迫切需要的，尤其是对社区医院第一接诊老年患者人群的全科医师提出了更高要求。

本研究针对来我院记忆门诊就诊或普通老年内科就诊的老年人群，认为自己或家人发现其有记忆逐渐下降，或性格改变的患者，独立生活能力下降等异常情况的60岁以上人群，排外脑梗死病史，以检测尿AD7c-NTP含量作为初筛，并同时进行简易精神神经量表评定(MMSE)、Hachinski缺血指数(HIS)、日常生活能力量表(ADL)测定，具体研究情况如下。

1.资料与方法

1.1 研究对象 2016年3月至2017年3月在昆明医科大学第一附属神经内科及记忆门诊就诊的老年志愿者共130例。入选标准：①所有病例均取得知情同意；②进行病史采集、全身及专科体格检查、头颅CT或MRI显示有脑萎缩，排除脑血管病引起的痴呆；③简易精神神经量表评定(MMSE)、Hachinski缺血指数(HIS)、日常生活能力量表(ADL)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)≤7；④甲状腺功能正常、梅毒抗体阴性；⑤血尿常规、肝肾功能、血糖、血脂、心电图、血压正常。MCI(轻度认知功能障碍)组40例，男性25例，女性15例，年龄60～91岁，平均年龄67.20±8.3岁；AD组40例，轻度22例，男性13例，女性9例，平均年龄73.80±8.35岁；中重度18例，男性7例，女性11例，年龄65～93岁，平均年龄71.63±9.56岁；智能正常对照组50例，男性27例，女性23例，年龄60～90岁，平均年龄72.83±8.42岁。

1.2 评定标准 AD符合美国美国国立神经病语言障碍脑卒中研究所和AD病及相关疾病协会(NINCDS-ADRDA)的很可能AD诊断标准[2]，MMSE:文盲≤17分，小学≤20分，中学及以上≤26分；HIS≤4分，HAMD≤8分。轻度的AD:19分≤MMSE≤26分；中重度的AD:MMSE<19分。MCI符合美国Mayo神经病学研究中心的Petersen诊断标准，MMSE:文盲18～27分，小学21～27分，中学及以上25～27分；HIS≤4分，HAMD≤8分。正常对照组为年龄性格匹配智能检查正常的老年人，无严重躯体疾病及精神障碍，MMSE 26～30分，HIS≤4分，ADL=20分。

1.3 AD7c-NTP测定 采用深圳市安群生物工程有限公司提供的AD7c-NTP检测试剂盒。留取被检测者中段晨尿，选取经尿常规检测合格的清亮标本，经过离心、过滤，取上清液2ml作为待测试液即样本，采用改良的ELISA双抗体夹心法，将样本加入试剂盒中，存在于样本中的AD7c-NTP与板上包被的抗体结合，通过洗板，将未结合的游离成分洗去；加入AD7c-NTP的多抗，温育后洗涤，再加入辣根过氧化物酶标记的酶结合物，最终形成抗体/抗原/抗体/酶标二抗的复合物，加入显色剂显色，15分钟后终止反应，在450nm处测OD值，根据已知浓度的校准品绘制出标准曲线，最终算出样本的AD7c-NTP含量，正常参考值≤1.5ng/ml。

2.结果

2.1 总AD组与MCI组及正常对照组 三组年龄构成经方差分析，差异无显著性(F=0.563,P=0.748)；三组性别构成，差异无显著性(χ2=0.12,P=0.86),总AD组MCI组，总AD组与正常对照组，尿液中AD7c-NTP比较均有差异显著性(P<0.01)，见表1。

表1 各组尿液AD7c-NTP含量比较

注：与总AD组比较：*P<0.01。

2.2 轻度AD组与中重度AD组尿液中AD7c-NTP比较均有差异显著性(P<0.01)，见表2。在重度AD组中有4例患者的7c-NTP含量<1.5ng/ml。

表2 各组尿液AD7c-NTP含量比较

注：与轻度AD组比较：*P<0.01。

3.讨论

1992年，麻省总医院的Suzanne de la Monte等人在AD脑中发现大量与神经元纤维缠结有关的神经丝蛋白(neural thread protein，NTP)[1]。1997年，De la Monte团队成功分离出AD7c的cDNA，命名为AD7c-NTP。尿AD7c-NTP可特异性反映大脑神经损伤，与Tau蛋白具有同等效力AD7c-NTP特异性分布大脑额叶、颞叶，只反映大脑神经元损伤；AD7c-NTP为神经元轴突跨膜蛋白，与Tau蛋白共同定位；尿AD7c-NTP蛋白特异性反映脑神经元损伤[2]。De la monte发现AD7c-NTP后，用尸检确诊的AD患者大脑切片进行研究。原位杂交和免疫组化染色发现：表达增加出现在组织学尚完整的变性神经元，证明异常AD7c-NTP蛋白表达增加是AD神经变性的早期事件[2]。

AD是一个进展性疾病，而AD7c-NTP是神经元损伤标志物，反映大脑神经元损伤的速度。文献表明AD7c-NTP的免疫反应性在早期神经炎性斑块中可以检测到，证明异常AD7c-NTP表达是AD的早期事件[2],在疾病的早期检测浓度可能更高更灵敏。MCI期患者由于大脑神经元开始大范围凋亡，分泌出AD7c-NTP蛋白，故根据不同受检者的疾病发展速度可检测到不同浓度水平的表达。国内临床实践表明MCI患者尿液AD7c-NTP水平显著高于健康组[3]。此外，早期AD7c-NTP浓度高低对疾病发展与预后有很好的提示作用。收集MCI患者尿液检测AD7c-NTP浓度，随后进行随访研究2年，结果表明：转化为AD的MCI组尿液AD7c-NTP水平显著高于稳定期MCI组，显示尿AD7c-NTP对疾病转归与预后具有一定的预测效力[4]。

在本研究中，我们观测到AD组的尿AD7c-NTP明显高于正常组，但是也检测到部分重度AD组的尿AD7c-NTP低于轻-中度AD组，甚至在正常范围即为阴性。文献研究表明：AD7c-NTP过度表达是AD的早期病理事件，AD7c-NTP表达的增加出现在组织学尚完整的变性神经元中[5]。而在另外一篇文献研究中也显示：AD7c-NTP的免疫反应性在早期神经炎性斑块中可以检测到，而在成熟斑块中却没有发现[6]，证明异常AD7c-NTP表达是AD的早期事件。因为随着疾病发展到重度时期，神经元发生变性和凋亡，而AD7c-NTP这样的神经丝蛋白也会随着被溶解和吸收。有文献研究证明：在凋亡的神经元中，未发现AD7c-NTP抗体免疫反应[6]。所有部分AD中晚期忠者，其尿AD7c-NTP很低。

尿AD7c-NTP阳性，说明脑额叶、颞叶神经元中Tau蛋白出现异常磷酸化的可能，正发生广泛性神经元损伤，提示大脑神经元发生异常损伤，建议：①控制高风险因素，②关注大脑健康，适当用脑，补充大脑营养。尿AD7c-NTP阴性，MMSE评分正常或稍低，说明脑额、颞叶未见广泛性脑神经元损伤，提示患者当前暂无异常脑损伤；而对于MMSE评分很低，达到认知功能严重障碍者说明AD中重度期[7]。

尿液AD7c-NTP检测技术对AD临床早期筛查意义重大，值得重视和推广应用。

1 DE LA MONTE SM，WANDS JR.Neuronal thread protein over-expression in brains with Alzheimer’s disease lesions.J Neurol Sci，1992，113(2):152-164.

2 De la Monte SM，Kasra Ghanbari.J Clin Invest,1997，100(12):3093-1041.

3 MA L，CHEN J，WANG R，HAN Y，ZHANG J，DONG W，ZHANG X，WU Y，ZHAO Z.The level of Alzheimer-associated neuronal thread protein in urine may be an important biomarker of mild cognitive impairment.J Clin Neurosci，2015，22(4):649-652.DOI：10.1016/j.jocn.2014.10.011.

4 Wang C, Cui Y, Yang J, et al. Combining serum and urine biomarkers in the early diagnosis of mild cognitive impairment that evolves into Alzheimer’s disease in patients with the apolipoprotein E ∈4 genotype[J]. Biomarkers Biochemical Indicators of Exposure Response & Susceptibility to Chemicals, 2015, 20(1):84-88.

5 MONTE SM，GHANBARI K，FREY WH，BEHESHTI I，AVERBACK P，HAUSER SL，GHANBARI HA，WANDS JR.Characterization of the AD7C-NTP cDNA expression in Alzheimer’s disease and measurement of a 41-kD protein in cerebrospinal fluid.J Clin Invest，1997，100(12):3093-3104.DOI：10.1172/JCI119864.

6 DE LA MONTE SM，CARLSON RI，BROWN NV，WANDS JR.Profiles of neuronal thread protein expression in Alzheimer’s disease.J Neuropathol Exp Neurol，1996，55(10):1038-1050.

7 彭丹涛.阿尔茨海默病诊治进展.中华老年医学杂志，2009，28(2):91-92.DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-9026.2009.02.028.

云南省卫生科技计划项目(编号2014NS140)

刘彬，硕士，副主任医师，主要研究领域：痴呆及脑血管病。

※通讯作者：任惠，硕士，主任医师，硕士生导师，主要研究领域：痴呆、帕金森病、癫痫。

10.3969/j.issn.1672-4860.2017.05.008

2017-8-21