张 旻，王 姝，王 娜，景宏丽，徐立蒲，吴 绍

（1.中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所，北京 100176；2.北京市水产技术推广站，北京 100176）

金鱼造血器官坏死病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

张 旻1，王 姝2，王 娜1，景宏丽1，徐立蒲2，吴 绍1

（1.中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所，北京 100176；2.北京市水产技术推广站，北京 100176）

金鱼造血器官坏死病毒（Goldfish haematopoietic necrosis virus，GFHNV）是一种可感染金鱼等鲤科鱼类，并可导致其死亡的疱疹病毒。为了快速检测病原，本研究根据GFHNV的主要衣壳蛋白（Major captor protein，MCP）序列中的一段保守基因序列，设计引物和TaqMan探针，建立了GFHNV特异性的实时荧光定量PCR检测方法；并利用PCR反应扩增出的MCP基因，制备了pUC-GFHNV重组质粒作为阳性对照。经试验，该方法检测限最低可达10个拷贝数的目的基因，而且与锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus，KHV）、甲鱼虹彩病毒（Softshell turtle iridovirus，STIV）、流行性造血器官坏死病毒（Epizootic haematopoietic necrosis，EHNV）、斑点叉尾鮰病毒（Channel catfish virus，CCV）以及白斑综合症病毒（White spot syndrome virus，WSSV）等5种水生动物病毒无交叉反应。该方法具有简便、快速、敏感、特异等优点，为该病的诊断与病原检测提供了一个重要手段。

鱼类病毒病；金鱼造血器官坏死病毒；主要衣壳蛋白；实时荧光定量PCR；TaqMan探针

金鱼造血器官坏死病毒（Goldfish haematopoietic necrosis virus，GFHNV）是第 2个分离自鲤科鱼类的疱疹病毒，为有囊膜的双链DNA病毒。其基因组大小约290.3 kb，外形呈二十面体，直径约120 nm[1]。国际病毒系统分类与命名委员会将其命名为鲤疱疹病毒2型（Cyprinid herpesvirus 2，CyHV 2），隶 属于 疱疹病毒目（Herpesvirales）异疱疹病毒科（Alloherpesviridae）鲤疱疹病毒属（Cyprinivirus）[2]。

GFHNV是金鱼造血器官坏死病（Goldfish haematopoietic necrosis，GFHN）的病原，可以感染金鱼、异育银鲫以及鲫鱼的其它变种，最适发病水温为15～25 ℃。……