刘 畅 ，逄春华 ，刘 存 ，王 静 ，刘 琪 ，梁 琳 ，袁维峰 ，钱爱东 ，崔尚金

（1. 吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春 130118；2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193；3. 农业部兽用药物与兽医生物技术北京科学观测实验站，北京 100193；4. 青岛机场出入境检验检疫局，山东青岛 266108）

CDV、CPV、CAV-2及CPIV多重PCR的建立及应用

刘 畅1，2，3，逄春华4，刘 存2，3，王 静2，3，刘 琪2，3，梁 琳2，3，袁维峰2，钱爱东1，崔尚金1，2，3

（1. 吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春 130118；2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193；3. 农业部兽用药物与兽医生物技术北京科学观测实验站，北京 100193；4. 青岛机场出入境检验检疫局，山东青岛 266108）

为建立一种快速检测犬瘟热病毒（CDV）、犬细小病毒（CPV）、犬腺病毒Ⅱ型（CAV-2）和犬副流感病毒（CPIV）的多重PCR方法，参照GenBank中的相关病毒基因序列，分别设计了4对引物，用于特异性扩增CDV H基因、CPV VP2基因、CAV-2 E3基因和CPIV NP基因上的目的片段。通过优化反应条件，建立了同时扩增CDV（410 bp）、CPV（253 bp）、CVA-2（655 bp）和CPIV（868 bp）的多重PCR方法。利用建立的多重PCR方法，对CDV、CPV、CAV-2、CPIV、CDV+CPV+CAV-2+CPIV和犬冠状病毒（CCV）的DNA或cDNA模板进行扩增，发现该方法的特异性良好。利用建立的多重PCR方法与单一PCR方法进行敏感性比较，发现两者敏感性相差10倍，证明多重PCR方法敏感性良好。利用该方法对从北京市采集的30份犬病料样品进行检测，发现CDV阳性率为63.33%（19/30）、CPV阳性率为33.33%（10/30）、CAV-2阳性率为6.66%（2/30）、CPIV阳性率为0（0/30）。检测结果证明建立的多重PCR方法可用于临床诊断。

多重PCR；犬瘟热病毒；犬细小病毒；犬腺病毒Ⅱ型；犬副流感病毒

犬瘟热病毒（Canine distemper virus，CDV），犬细小病毒（Canine prvovirus，CPV），犬腺病毒Ⅱ型（Canine adenovirus type-2，CAV-2）和犬副流感病毒（Canine parainf l uenza virus，CPIV）是引起犬类疾病的主要病原体。……