赵海洲，莫灿坤，林展乐，刘文华

肇庆学院 生命科学学院，广东 肇庆 526061

稳定表达GFP-Parkin融合蛋白的SH-SY5Y细胞系的建立和功能初探

赵海洲，莫灿坤，林展乐，刘文华

肇庆学院 生命科学学院，广东 肇庆 526061

目的：建立稳定表达GFP-Parkin的SH-SY5Y细胞系，并检测Parkin对MPP+引起的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法：将Parkin编码序列克隆到载体pEGFP-C1中，构建重组质粒pEGFP-Parkin，转染SH-SY5Y细胞，通过G418筛选，建立稳定表达GFP-Parkin的SH-SY5Y细胞系；荧光显微镜和Western印迹鉴定Parkin表达，MTT法检测Parkin对MPP+致细胞损伤的保护作用。结果：酶切鉴定及测序结果表明重组质粒pEGFP-Parkin构建正确；荧光显微镜下可见细胞内有GFP-Parkin的融合表达，Western印迹检测发现相对分子质量79×103的蛋白条带；MTT结果显示Parkin能够减弱MPP+对SH-SY5Y细胞的损伤，与对照组相比，存活率高约15％，差异显著（P＜0.05）。结论：构建了稳定表达GFP-Parkin的SH-SY5Y细胞系，为进一步研究Parkin的细胞保护作用和其他功能机制奠定了基础。

Parkin蛋白；SH-SY5Y细胞；稳定表达；MPP+

帕金森病（Parkinson's disease，PD）是第二大常见的神经退行性疾病，主要特征表现为静止性震颤、肌僵直、姿势异常及记忆力减退等。85％～90％的帕金森病患者呈散发性，其发病与农药、重金属等环境因素息息相关[1]。此外，帕金森病也存在家族遗传性，5％～15％的帕金森病患者由单基因家族遗传方式引起，这些基因包括Parkin（PARK2）、DJ-1（PARK7）、ATP13A2（PARK9）、PTEN-induced putative kinase 1（PINK1）、LRRK2（PARK8）和 SNCA（PARK1，4）等[2]。

Parkin基因于1998年被克隆，其突变呈现常染色体隐性遗传的青少年型帕金森病（autosomal recessive juvenile parkinsonism，ARJP）[3]。该基因定位于染色体6q25.2-27，位于遗传标记D6S305和D6S253之间，含12个外显子，基因的开放读框为1395bp，所编码的蛋白Parkin含465个氨基酸残基。Parkin基因的缺失和位点突变与ARJP相关[4-5]。Parkin是一种E3泛素连接酶，在上游基因PINK1的启动下，Parkin可以识别异常折叠蛋白，介导底物蛋白泛素化，进而通过泛素-蛋白酶体途径降解异常折叠蛋白[6]。……