张文宁，王芃，周建光，王健，秦崇涛，李宗，李山虎

1.福建中医药大学 药学院，福建 福州 350122；2.军事医学科学院 生物工程研究所，北京100850；3.福建省食品药品认证审评中心，福建 福州 350003

人4型腺病毒拷贝数SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法的建立

张文宁1，王芃2，周建光2，王健2，秦崇涛1，李宗3，李山虎2

1.福建中医药大学 药学院，福建 福州 350122；2.军事医学科学院 生物工程研究所，北京100850；3.福建省食品药品认证审评中心，福建 福州 350003

目的：建立检测人4型腺病毒拷贝数的荧光定量PCR方法。方法：提取本实验室构建的4型腺病毒全基因组质粒，以梯度稀释质粒为标准模板，选取人4型腺病毒六邻体区域基因设计一对特异性引物，进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线。结果：标准曲线为y=-4.284x+53.468，由全基因组质粒所构建的标准曲线线性关系良好，扩增反应Ct值与拷贝数的对数呈线性关系（R2=0.999 609），检出敏感度可达1×102拷贝/μL，且与其他几种腺病毒无交叉反应。用该方法检测4型腺病毒感染细胞2、12和24h后的病毒拷贝数，其病毒拷贝数随时间增加，与细胞病变（CPE）变化保持一致，且荧光定量PCR的测量结果稳定（变异系数＜6％）。结论：建立了检测人4型腺病毒基因拷贝数的荧光定量RT-PCR方法，该方法灵敏度高、特异性强。

人4型腺病毒拷贝数；实时荧光定量PCR；标准曲线

人腺病毒（human adenovirus，HAdV）是一种无包膜的DNA双链病毒，最早于1953年从小儿扁桃体中分离得到[1-2]，主要在细胞核内繁殖，常引起人上呼吸道和眼部上皮细胞感染。根据其不同的免疫学、生物和生化特性，可分为A～G共7个亚群，国际病毒分类委员会（ICTV）已公布了57种血清型[3]。……