常向前,王得顺,张爱红,徐力红,林虹君

1.武警天津市总队医院 检验科，天津 300171；2.防化学院，北京 102205；3.空军防化大队，北京 102206

基于原子转移自由基聚合反应的高灵敏度ELISA方法研究

常向前1,王得顺1,张爱红2,徐力红3,林虹君3

1.武警天津市总队医院 检验科，天津 300171；2.防化学院，北京 102205；3.空军防化大队，北京 102206

目的：对传统酶联免疫吸附测定法（ELISA）进行优化改进，以提高其检测灵敏度，拓展应用范围。方法：通过在传统ELISA方法中引入原子转移自由基聚合反应（ATRP）和纳米金颗粒（GNPs），并将大量辣根过氧化物酶（HRP）与二抗结合，提高了HRP与抗原的结合比例，进而实现了对待检测物的信号放大。结果：优化后的ELISA方法在对β淀粉样蛋白的检测中，检测限（LOD）降低为原来的1/81。结论：改进后的ELISA方法性能稳定，灵敏度大幅提高，能够用于对痕量目标检测物的检测。

原子转移自由基聚合反应；纳米金；酶联免疫检测

1971年瑞典学者[1]和荷兰学者[2]分别报道了将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）。ELISA方法是利用抗原、抗体两者在化学结构和空间构型上呈现的互补关系对待测物进行检测，因此该方法具有高度的特异性。此外，该方法还可实现在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上进行定量。因此，酶联免疫法是目前在痕量生物标志物、目标蛋白质检测中使用最广的方法之一[3-5]。

尽管ELISA方法具有灵敏度高、重复性好、使用方便等优点，但随着科研和实际应用要求的不断提高，其在疾病早期预防、超痕量目标物检测中仍不能满足要求[6-10]。……