丁良，李芝香，汪慧渊，肖刚，郭青玉

西安交通大学 口腔医院儿童牙病科，陕西 西安 710004

实时定量聚合酶螺旋反应定量检测变形链球菌方法的建立

丁良，李芝香，汪慧渊，肖刚，郭青玉

西安交通大学 口腔医院儿童牙病科，陕西 西安 710004

目的：建立实时定量检测口腔内变形链球菌的实时定量聚合酶螺旋反应（PSR）方法。方法：针对变形链球菌的gtfB基因设计4套引物，通过实时浊度法和显色法两种方法判断结果。结果：从4套引物中筛选出最佳引物，并确定最佳温度为65℃；进一步实验表明采用最佳引物能特异性地检测变形链球菌，与13种其他病原核酸无交叉反应，敏感性达10拷贝/μL。结论：建立了实时定量检测变形链球菌的PSR方法，该方法具有简单快速、特异性强、敏感性高的特点，为实时定量检测变形链球菌提供了新技术。

聚合酶螺旋反应；变形链球菌；龋病；实时定量

变形链球菌（Streptococcus mutans）是口腔内的主要致龋菌，具备黏附牙面的能力，在牙菌斑中产酸且耐酸，能使牙齿表面脱矿，进而导致龋损[1]。婴儿出生后，变形链球菌通过母亲或携带者的唾液在其口腔内定植，且定植时间越早，发生低龄儿童龋的概率越高[2]。检测变形链球菌的传统方法是培养法，将菌斑或唾液样本在选择培养基上培养分离变形链球菌后计数。这种培养分离后计数的方法只能检测活菌的数目，不能准确反映样品中细菌的总数目，而且计数结果受观察人员主观性影响较大[3]。除了培养法，其他常用的检测和鉴定变形链球菌的方法有生化检测法、免疫检测法、DNA探针法和PCR法等[4]，但这些方法具有耗时长、不能定量的缺点。……