徐伟莉 牛保华

Mcl-1与高尔基体磷酸化蛋白在结肠癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系

徐伟莉 牛保华

目的探究髓细胞白血病-1(Mcl-1)与高尔基体磷酸化蛋白(Golph3)在结肠癌组织中的表达水平及与其临床病理特征的关系。方法应用免疫组化方法，检测60例结肠癌组织中Mcl-1、Golph3表达水平，并与其癌旁正常组织中的表达水平进行比较。结果Golph3、Mcl-1在正常组织及结肠癌组织中均有表达，然而在结肠癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁正常组织(P<0.05)；Mcl-1表达水平与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移无明显相关性(P>0.05)，与肿瘤浸润深度、临床分期密切相关，浸润程度大，临床分期Ⅲ、Ⅳ期结肠癌组织中Mcl-1阳性表达率显著较高(P<0.05)；Golph3水平与浸润深度、淋巴结转移密切相关，浸润程度大，发生淋巴结转移患者组织中Golph3阳性表达率明显较高(P<0.05)。结论Mcl-1、Golph3参与结肠癌的发生、发展过程中，与正常组织相比其表达量显著升高，且与肿瘤远端转移、淋巴结转移，临床分期等病理参数密切相关。

结肠癌；Mcl-1；Golph3；免疫组化；临床病理

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1420～1422)

结肠癌是好发于直肠及直肠与乙状结肠交界处的肿瘤。流行病学研究结果显示，在西方发达国家结肠癌的发病率在恶性肿瘤中位居第二[1]；在我国，随着社会环境、生活方式(饮食习惯，缺乏运动)的改变，结肠癌的发病率呈上升趋势，且具有高致死率。其致死率在男性中位居第五，在女性中位居第六[2]。与其他恶性肿瘤类似，结肠癌具有生长迅速，浸润性强且易转移的特点，这也是其难治愈病死率高的重要原因。根治性手术辅助以放化疗是目前而言治疗结肠癌的主要临床手段，然而不可避免的会出现肿瘤复发及转移现象，造成预后不良[3-5]。肿瘤的发生、发展过程受多种基因的调控，相应的蛋白水平表达异常也与肿瘤活动密切相关。因此，积极探究参与结肠癌病理过程中的蛋白分子的表达情况及其对病理参数的影响对于结肠癌的分子靶向治疗有着重要的意义。已有研究报道，Mcl-1是新近发现的属于bcl-2家族的凋亡控制基因，其表达量下调可促进肿瘤细胞凋亡，提示Mcl-1可能是治疗肿瘤的新靶点[3,6]。高尔基体磷酸化蛋白是一类功能强大的癌基因，在肺癌、胃癌中均已证实其高表达与肿瘤增殖活动密切相关[7]。本研究采用免疫组化方法探究结肠癌患者组织Mcl-1与高尔基体磷酸化蛋白表达水平与临床病理之间的相关性，以期为结肠癌发病机制、早期诊断提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集我院2006年2月至2016年2月，收治的60例经外科手术切除并经病理检查确诊为结肠癌患者的结肠癌组织及距结肠癌远端至少10 cm的癌旁正常组织(镜下诊断无癌组织浸润)，其中男性37例，女性23例，平均年龄(58.69±5.4)岁；所有患者的手术标本均在离体30 min内采集，于液氮中储存。TNM分期参考美国癌症联合委员会(AJCC)或国际抗癌联盟(UICC)的结肠癌分期系统。

1.2 纳入标准

①所有病例在术前均未行放化疗。②病例资料完整，均与家属签署知情同意书。该研究获得我院伦理委员会批准。

1.3 方法

1.3.1 免疫组织化学 采用免疫组化SP法，具体操作按照说明书进行。4 μm连续切片后68 ℃烤片20 min，常规使用二甲苯脱蜡及梯度酒精脱水，灭活内源性过氧化物酶之后使用0.01 M枸橼酸缓冲液(pH 6.0)行抗原修复。在玻片标本组织上滴加已稀释好的一抗(兔抗人Mcl-1单克隆抗体，编号：AF0094，生产厂家：Affinity公司；兔抗人Golph3单克隆抗体，编号：ab98023，生产厂家：ABCAM公司)，4 ℃孵育过夜。复温1 h后加通用型生物素化二抗室温孵育30 min，之后滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素于37 ℃孵育30 min。使用DAB显色试剂盒进行显色，苏木精复染，脱水并封片。

1.3.2 结果判定 Mcl-1蛋白染色与高尔基体磷酸化蛋白(Golph3)染色以细胞质或者细胞核中出现淡黄色至棕黄色颗粒为阳性。根据阳性细胞染色强度及阳性细胞率计分，两者得分相乘，总分≤4分为阴性表达，总分>4分为阳性。染色强度评分：无色计0分；淡黄色1分；棕色2分；棕褐色3分；阳性细胞率评分：随机选取5个视野，阳性细胞数<5%计0分；5%～25%计1分；26%～50%计2分；>50%计3分。由两名病理科副主任医师独立阅片。

1.4 统计学分析

应用SPSS 17.0软件，计数资料用卡方检验对比分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Mcl-1、Golph3表达水平在结肠癌组织及正常癌旁组织中的差异

免疫组化结果显示：Golph3、Mcl-1在正常组织及结肠癌组织中均有表达，然而结肠癌组织中其阳性表达率均显著高于癌旁正常组织(P<0.05)，见表1。

表1 Mcl-1、Golph3在不同组织中表达水平差异(例，%)

2.2 Mcl-1、Golph3表达水平与其临床病理参数的关系

Mcl-1表达水平与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移无明显相关性(P>0.05)，与肿瘤浸润深度、临床分期密切相关，浸润深度深，临床分期Ⅲ、Ⅳ期结肠癌组织中Mcl-1阳性表达率显著较高(P<0.05)；Golph3水平与浸润深度、淋巴结转移密切相关，浸润深度深，发生淋巴结转移患者组织中Golph3阳性表达率明显较高(P<0.05)，见表2。

3 讨论

近年来结肠癌的发病率逐年升高，其合并易转移易复发等特点使得通过手术切除治疗的临床效果不佳，如何早期诊断及控制结肠癌的发展一直是临床医师面临的难点。目前，关于肿瘤的分子靶向治疗是该领域研究热点。恶性肿瘤增殖过程中，常伴随一些原癌基因的激活或者抑癌基因的失活，进而导致肿瘤细胞内蛋白的异常表达[6,8]。因此，探索肿瘤发生、发展过程中蛋白的表达变化，对于肿瘤的靶向治疗及临床预测均有积极的意义。本文采用免疫组化方法探究结肠癌患者组织Mcl-1与Golph3表达水平与临床病理之间的相关性，研究结果表明，结肠癌组织中Mcl-1与Golph3的阳性表达率显著高于正常癌旁组织，提示Mcl-1、Golph3参与了结肠癌病变的生理过程。为了进一步探究其在结肠癌中的作用，我们分析了Mcl-1、Golph3表达水平与临床病理参数之间的关系，结果显示：Mcl-1表达水平与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移无明显相关性，与肿瘤浸润深度、临床分期密切相关，浸润程度大，临床分期Ⅲ、Ⅳ的结肠癌组织中Mcl-1阳性表达率显著较高；Golph3水平与浸润深度、淋巴结转移密切相关，浸润程度大，发生淋巴结转移患者组织中Golph3阳性表达率明显较高。

表2 Mcl-1、Golph3表达水平与其临床病理参数的关系/例

髓细胞白血病基因-1(Mcl-1)是细胞凋亡控制蛋白，其主要作用机制为：维持线粒体细胞膜结构稳定，促进细胞生存，在细胞毒制剂等诱导细胞凋亡的条件下可通过螯合促凋亡蛋白Bax/Bak而抑制肿瘤细胞凋亡，还可与增殖细胞核抗原相互作用来调控细胞分化过程[7,9]。已有较多报道证实在白血病、肝癌、宫颈癌中都存在Mcl-1过表达。另外，Fleischer等[10]在肝癌组织中发现高水平的Mcl-1，在采用特异性抑制剂(LY294002)后，Mcl-1水平迅速下调，并且提高了化疗药物的敏感性，提示Mcl-1是肝癌治疗的潜在靶点。高尔基体磷酸化蛋白(Golph3)是位于高尔基体的膜蛋白，在维持高尔基体结构，蛋白糖基化等过程中具有重要的作用，研究显示在癌细胞中蛋白糖基化过程紊乱，这可能与肿瘤增殖、黏附、迁移和浸润有关[11-12]。在正常组织中Golph3的表达量较低，然而在胃癌、乳腺癌、神经胶质瘤等病变中检测到Golph3表达上调。

综上所述，Mcl-1、Golph3参与于结肠癌的发生、发展过程中，与正常组织相比其表达量显著升高，且与肿瘤远端转移、淋巴结转移，临床分期等病理参数相关。

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(编辑：吴小红)

ExpressionofMyeloidLeukemia-1 (Mcl-1)andGolgiPhosphorProtein(Golph3)inColonCarcinomaandItsRelationshipwithClinicalPathologicalFeatures

XUWeili,NIUBaohua.

XinxiangSecondPeople'sHospital,Xinxiang,453002

ObjectiveTo investigate the expression of myeloid leukemia-1 (Mcl-1) and Golgi phosphor protein (Golph3) in colon carcinoma and its relationship with clinical pathological features.MethodsThe expression level of Mcl-1 and Golph3 in 60 cases of colon cancer tissues were detected using immunohistochemical method,and compared with adjacent normal tissues.ResultsMcl-1 and Golph3 in normal tissues and colorectal cancer tissues were expressed,but in colon cancer tissues the positive expression was significantly higher than normal tissues (P<0.05);there was no significant difference between the expression level of Mcl-1 in patients and gender,age,tumor differentiation,lymph node metastasis (P>0.05).But the expression level of Mcl-1 in patients was closely related to the clinical stage,the depth of tumor invasion.The positive expression rate of Mcl-1 in colon cancer with clinical stage Ⅲ，Ⅳ and depth of tumor invasion was significantly higher (P<0.05).The expression level of Golph3 was related to infiltration depth and lymph node metastasis,while Golph3 has significantly higher expression in lymph node metastasis tissues and the large degree of invasion (P<0.05).ConclusionMcl-1,Golph3 are involved in the process of development colon cancer,and the expression significantly increased compared with the normal tissue,which are related to distal metastasis tumor,lymph node metastasis,clinical stage,pathology the parameters.

Colon carcinoma;Myeloid leukemia-1(Mcl-1);Golgi phosphor protein (Golph3);Immunohistochemical;Clinical pathological

453002 河南省新乡市第二人民医院(徐伟莉)；475004 河南大学医学院(牛保华)

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.09.007

R735.3+5

A

1001-5930(2017)09-1420-03

2016-11-08

2017-07-10)