北京市宣武中医医院（100050）李长萍

北京中医药大学中药学院（100102）姜丹 陈铭阳 刘春生

近年来，中药市场中以次充好的现象呈增加趋势，质量不合格的中药如果流入医院药房，不但会影响病人用药的有效性，长此以往还会影响医生对处方中用药剂量的判断。而在医院药房中药材验收工作中，验收品种多、数量大，效率较低，因此建立一种快速有效、操作简便的评价中药质量的方法具有一定的现实意义。

在《中国药典》中，评价多数中药饮片的质量主要依靠浸出物和指标性成分含量两个标准[1]，其中含量测定标准能够反映中药中单个或数个指标性成分含量是否合格，醇溶性浸出物含量标准则能够反映中药中所有醇溶性成分总含量是否达标。目前有文献报道的评价防风质量的方法多数是基于各种指标性成分或活性成分如升麻素苷、升麻素、5-0-甲基维斯阿米醇苷、色原酮等，李硕等建立了一种基于灰色关联度法评价商品防风药材质量的方法，但却鲜有关于醇溶性浸出物含量的报道。《中国药典》中规定的测定醇溶性浸出物及指标性成分含量的步骤繁琐，耗时较长，为保证药品质量，确保临床用药的安全有效，同时节省人力物力，笔者现结合工作实践，将一种快速评价防风质量的方法报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；METTLER AE 240电子分析天平(d=0.1mg 北京赛多利斯仪器系统有限公司)；HH-4数显恒温水浴锅（金坛市华峰仪器有限公司）；岛津LC20A型高效液相色谱仪（LC-20AT高效泵，SPD-20A检测器，LC solution工作站，日本岛津公司）。

1.2 试剂与饮片乙醇（分析纯，北京化工厂），甲醇（色谱纯，美国Fisher公司），升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷标准品（上海将来生化试剂有限公司）。所用防风饮片经北京中医药大学中药鉴定系主任刘春生教授鉴定，基原均为伞形科植物防风。

2 实验方法

2.1 醇溶性浸出物含量测定 依《中国药典》2015版所述，防风采用醇溶性浸出物测定法下的热浸法测定。取供试品2g，精密称定，置100mL锥形瓶中，精密加醇50mL，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量(%)[1]。

2.2 指标性成分含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备 取升麻素苷对照品及5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1mL各含60mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备取防风细粉约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，水浴回流2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 HPLC分析条件 色谱柱：Agilent ZORBAXEclipse XDB C18色谱柱（25cm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水(40:60)，流速1 mL/min；检测波长254nm。

2.2.4 测定方法 分别精密吸取对照品溶液各3μL与供试品溶液2μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.3 制备醇浸液供试品的方法学考察 影响供试品溶液的因素有药材饮片的粉碎度，浸泡时的温度和浸泡时间，基于此，设计如附表1所示正交试验确定获得供试品溶液的最佳方法。

根据《中国药典》中规定的饮片和醇的比例，取防风饮片（粉末）1g，精密称定，置100mL锥形瓶中，精密加入无水乙醇25mL，置室温下浸泡（水浴锅中加热）指定时间后过滤，测定滤液在特定波长下的吸光度。

2.4 供试品溶液吸光度测定

2.4.1 最大吸收波长的测定 取2.1项下获得的滤液在190～700nm做紫外可见全波长扫描，确定其最大吸收波长。

2.4.2 吸光度测定 取2.3项下的滤液，稀释10倍后在2.3.1项得到的最大吸收波长下分别测定吸光度。

3 结果与分析

3.1 制备供试品溶液方法学考察结果 紫外-可见全波长扫描显示防风醇浸液的最大吸收波长在228nm。依据附表1设计的正交试验结果如附表2所示。根据附表2得到的结果绘制不同条件下防风醇浸液的吸光度随浸泡时间的变化曲线，如下面附图1～4所示。

附表1 防风醇溶性浸出物正交试验因素水平表

附表2 防风醇浸液正交试验结果表

附表3 22批防风的醇浸液吸光度及各组分含量测定结果

从4个附图中可以看出防风饮片无论是在室温还是在50℃水浴加热下浸泡，醇浸液的吸光度均难以在1h内达到一个稳定的值；而防风粉末在室温和50℃水浴加热下浸泡，醇浸液的吸光度均能在20min以内时达到一个稳定的值。故此选用室温浸泡防风粉末20min的条件获取醇浸液。

3.2 防风醇浸液吸光度与各组分含量相关性分析 按上述方法获得的22批防风的醇浸液吸光度及其醇溶性浸出物含量测定结果如附表3所示。

附图1 室温下浸泡防风饮片醇浸液吸光度随浸泡时间变化图

附图2 水浴加热下浸泡防风饮片醇液吸光度随浸泡时间变化图

附图3 室温下浸泡防风粉末醇浸液吸光度随浸泡时间变化图

附图4 水浴加热下浸泡防风粉末醇液吸光度随浸泡时间变化图

使用SAS8.2软件分析三组变量两两之间的相关性，各组数据服从正态分布，因此选用pearson相关系数。

醇浸液吸光度（x）与醇溶性浸出物（y）的相关性计算结果如下：rs=0.449 P=0.036＜0.05证明防风醇浸液吸光度与醇溶性浸出物含量之间有显著正相关关系。

醇浸液吸光度（x）升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷总含量（z）的相关性计算结果如下：rs=0.288 P=0.194＞0.05证明防风醇浸液吸光度与其指标性成分总含量之间无显著相关关系。

由此可知，根据3.1中确定的方法获得的防风醇浸液的吸光度与其醇溶性浸出物含量具有显著正相关关系（P＜0.05），但与《中国药典》中规定的指标性成分总含量并无显著相关关系。因此，通过该方法获得的醇浸液的吸光度虽然可反映防风醇溶性浸出物含量，但并不能体现药典中的指标性成分总含量。

4 讨论

本研究建立了一种快速、简便且较为准确地检测防风饮片醇溶性浸出物含量是否合格的方法。利用本法，可快速筛选出醇溶性浸出物含量不合格的防风，它们的醇浸液吸光度值显著低于其他大多数合格产品。

在方法学考察中，防风饮片在不打粉的情况下，醇浸液的吸光度在1 h 内不能达到一个稳定的值，究其原因是因为防风饮片与醇的接触面积远小于粉末与醇的接触面积，如果方法中改用饮片进行实验，无法达到快速检测的预期，并且防风饮片大小不一，很难找到吸光度稳定的极值点。在是否水浴加热的选择中我们发现，无论是在室温下还是在5 0 ℃水浴加热，醇浸液的吸光度均在10min左右到达极限，为了在检测过程中节省成本，简化步骤，故此选择在室温下浸泡防风粉末的方法。

《中国药典》中规定防风饮片醇溶性浸出物含量低于13%或升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷总含量低于0.24%均为不合格[1]，这22批防风中醇溶性浸出物含量低于合格限有16批，而升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷总含量全部合格，可见市场上防风饮片的指标性成分大多数高于合格限，而另一指标醇溶性浸出物含量则大多不合格，因此对市场上防风醇溶性浸出物含量的检测和控制是十分必要的。本研究中报道的方法所获得的醇浸液吸光度值虽然不能反映防风饮片中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的总含量，但可以一定程度上反映饮片中的醇溶性浸出物含量，具有一定实际意义。

综上所述，本方法能为药房工作人员节省下大量的检测时间，且能将此法扩展到其它中药饮片的快速质量评价中，具有较高的实际应用价值，能为中药饮片的快速质量评价提供有力的技术支持。