【摘 要】HPLC是目前医学、化学、工业和农学领域十分重要的技术手段，在分离分析技术领域具有十分广泛的应用。其技术手段主要选用高压输液系统，通过对混合溶剂或单一溶剂的不同极性进行检查，从而分析出固定相的色谱柱。本文在对民族药材天仙子进行测试的过程中，为了探究天仙子中含有金丝桃苷的含量，选用了HPLC法进行测定，通过严格的实验步骤，对天仙子花、叶、茎三部分中金丝桃苷的含量分别进行了测算并得出结论。

【关键词】高压输液；固定相色谱柱；分离分析技术；高效液相色谱

在中医领域，针对胃脘挛痛、喘咳等症状，通过辩证，一般会选择天仙子作为主要的药材。经过现代医学分析，天仙子作为茄科植物，其内部含有的莨菪碱、阿托品等成分，具有抑制腺体分泌的作用，能够使痉挛状态平滑肌得到迟缓。不过由于含阿托品药物在临床当中存在对心脏的抑制作用，因此被定位为有毒。因此需要对天仙子中金丝桃苷的含量进行测定，从而使其作为药材质量的评价标准。

一、实验器材选择

在HPLC高效液相色谱法的实验当中需要具备高效液相色譜仪、色谱分析平台、对照样品、色谱纯等器材和用具。为了保证实验的准确性。原料本文选用了内蒙古地区生长的野生天仙子药材。高效液相色谱仪则选用由美国著名仪器生产厂家安捷伦公司生产的1100型高效液相色谱仪，该厂家生产的设备仪器在目前市场当中占有率较高，以其系统性能指标卓越、组合方式灵活多变著称。色谱分析平台则选用了目前市面上常见的由北京北分天普仪器生产的GC-8600型气相色谱分析仪，该仪器具有独创的图形化中文界面，同时通过大屏幕液晶进行数据显示，人机互动模式更加先进，在实验分析过程中，效果突出。对照样品金丝桃苷由中国药品生物制品检定所提供，保证实验数据准确。色谱纯选用甲醇，分析纯试剂包含有三乙胺溶液、磷酸等，水选用纯化水。

二、实验方法和过程

（一）实验条件设定和实验制备

在实验开始之前，首先要对色谱条件进行设定。根据试验需要，设定甲醇-三乙胺溶液-磷酸和水的比例为225：1：1：300，同时色谱条件为5μm的C18柱，规格为4.6mm*20mm。溶液配比流速设定为1mL/min，温度控制在28℃-32℃之间，进样量为10-15μL。利用精密称对金丝桃苷对照样品进行适量称取，将称取样品加入到容量为0.058mg/mL的甲醇制成溶液当中，成为对照样品溶液。将原料天仙子进行粉碎，使用百目筛进行过滤，过滤完成之后通过精密称进行称取，称取含量根据溶剂量适当增减，本文为0.1g，将称取后的天仙子粉末放置到预先准备的具塞锥形瓶当中，并将10mL甲醇倒入，使用超声仪器进行处理，约一个小时后，停止超声处理，进行冷却滤过，并使用量瓶加入甲醇，使其摇匀，获得原料试品溶剂。

（二）关系考察

关系考察实验分为专属性关系实验考察和线性关系实验考察。其中，专属性关系实验考察首先要使用精密仪器对甲醇金丝桃苷溶液进行吸取，以及甲醇金丝桃苷阴性溶剂、原料试品溶剂等溶剂，各10μL，将其注入到液相色谱仪当中。通过色谱仪进行测试，并由气相色谱分析仪对分析结果进行显示。显示过程中发现，金丝桃苷对照品试剂的色谱峰峰纯度极佳，而原料试品溶剂的色谱峰峰值的保留时间与金丝桃苷对照品试剂的时间相同，表明纯度优秀。与此同时，甲醇阴性溶剂并未出现吸收现象，证明该方法专属性较强，不会受到阴性溶剂的干扰。

线性关系实验中，首先要选用10mL量瓶，通过精密仪器对金丝桃苷对照品溶剂进行1mL的吸取，将其放置入量瓶当中，并通过甲醇进行稀释，稀释至量瓶刻度后，将其命名为甲溶液。在甲溶液中进行三次不同量的吸取，分别为1μL、2μL、4μL，同时在原金丝桃苷对照品溶剂中进行四次不同量的吸取，前三次与甲溶液吸取量相同，最后一次吸取8μL，并将溶液注入到高效液相色谱仪中，对峰面积进行测定。并将峰面积和进样量作为变量进行线性回归坐标分析，通过线性回归方程的分析和计算，可以发现，金丝桃苷在0.46μg以内具有十分良好的线性关系。

（三）重复性和回收率实验

在原料天仙子溶剂的制备过程中，依照本文的实验目的要求，需要根据天仙子的不同部位分别进行含量测定。因此在制备过程之处，本文就优先将制备粉末分为叶粉末溶剂、花粉末溶剂和茎粉末溶剂等不同溶剂。在实验过程中，优先选用叶粉末溶剂进行实验，其他部分实验步骤与之相同。重复性实验要将同一批次的原料溶剂制备多份样品溶剂，利用前文中的线性回归方法进行含量分析。经测算，在叶粉末溶剂当中，金丝桃苷平均含量约为0.172%。而回收率实验则需要在多份样品制备的溶剂当中，分别取用50mg，并利用线性关系实验相同的方法进行甲溶液制备，通过高效液相色谱仪进行含量测算，同时计算平均回收律。

三、实验结果分析

本文在对叶粉末溶剂进行实验测量，结果显示，多份试剂样品的回收率平均为103.51%，RSD约为1.71%。在使用同样的实验方法对天仙子原料溶剂进行分别测试后可以得出数据结论。其中，天仙子花中金丝桃苷含量约为0.193%，天仙子叶中金丝桃苷含量约为0.172%，天仙子茎中金丝桃苷含量约为0.057%，平均含量约为0.129%。鉴于金丝桃苷属于黄酮类化合物，是多种生物活性的代表，金丝桃苷在天仙子中不同部位的富集，可以作为药材质量评判的主要依据。

四、结论

综上所述，本文通过HPLC法对天仙子药材中的金丝桃苷含量进行检测，检测结果表明，金丝桃苷主要富集于天仙子的花叶茎部，而根部和种子当中，金丝桃苷含量极低，这表明天仙子是一种具有深度开发价值的天然药材，而其是否具有毒性则主要取决于生物碱的含量和富集部位。

作者简介：张羽欧（1997-），女，黑龙江省佳木斯市人，本科，研究方向：制药方向。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：41.endprint