钱金锋，杨其昌，张晓娟，朱燕

（江苏省南通市第一人民医院 病理科，江苏 南通 226001）

Kif2a和淋巴结转移密度对乳腺癌的预后价值研究

钱金锋，杨其昌，张晓娟，朱燕

（江苏省南通市第一人民医院 病理科，江苏 南通 226001）

目的 探讨驱动蛋白家族成员2a（Kif2a）和淋巴结转移密度（ND）对乳腺癌的临床病理学意义及预后评估。方法 采用免疫组织化学法检测116例乳腺癌组织中Kif2a蛋白的表达，按ND分为ND=0组、ND≤40%组和ND＞40%组，分析Kif2a蛋白的表达、ND与乳腺癌患者的临床病理因素（年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学类型、TNM分期）、内分泌表型（雌激素受体、孕激素受体）、HER-2及预后的关系。采用Kaplan-Meier生存曲线分析，评价Kif2a蛋白表达、ND与乳腺癌患者的预后。结果 乳腺癌组织中Kif2a蛋白的表达、ND均与患者 TNM 分期及 HER-2的阳性表达呈正相关（rs=0.251、0.489、0.536和 0.245，P=0.007、0.000、0.000和0.008），与其他临床病理因素无关（P＞0.05）。Kif2a的表达与 ND 呈正相关（rs＝0.484，P=0.000）。生存曲线分析结果显示，Kif2a蛋白表达越强、ND越高，无瘤生存时间越短（P＜0.05）。结论 驱动蛋白Kif2a、ND可能是乳腺癌患者预后的独立因素，其对判断乳腺癌患者的预后具有一定价值。

乳腺癌；Kif2a；淋巴结转移密度；预后

Abstract:Objective To investigate the clinicopathological significance and prognosis of kinesin family member 2a (Kif2a)expression and lymph node metastasis density (ND)in breast cancer.Methods The expression of Kif2a protein in 116 cases of breast cancer was detected by immunohistochemistry.According to the results of ND the patients were divided into ND=0 group,ND≤40%group and ND＞40%group.Relations of of Kif2a expression and ND with the clinicopathological factors (age,tumor location,tumor size,histological type and TNM stage),endocrine phenotypes (ER,PR),HER-2 and prognosis in breast cancer patients were analysed.Kaplan-Meier survival curve was applied to evaluate the expression of Kif2a protein,ND and prognosis of the patients with breast cancer.Results Both Kif2a protein expression and ND were positively correlated with TNM stage and positive HER-2 expression in breast cancer(rs=0.251,0.489,0.536 and 0.245;P=0.007,0.000,0.000 and 0.008),but not correlated with other clinicopathological factors (P＞0.05).The expression of Kif2a was positively correlated with ND(rs=0.484,P=0.000).Survival curve analysis showed that the higher the expression of Kif2a protein,the higher the ND,the shorter the tumor-free survival time (P＜0.05).Conclusions Kif2a and ND may be independent prognostic factors in patients with breast cancer,and may have certain value in predicting the prognosis of patients with breast cancer.

Keywords:breast cancer;Kif2a;lymph node metastasis density;prognosis

世界卫生组织报道，2012年全球女性新发乳腺癌约1676600例，死亡约521900例，位居各种癌症的首位[1]。我国乳腺癌发病率有逐年上升的趋势，乳腺癌发病的高峰年龄为45～60岁，并呈年轻化趋势[2]。本文通过回顾性分析，探讨驱动蛋白家族成员2a（kinesin family member 2a，Kif2a）的表达、淋巴结转移密度（lymph node metastasis density，ND）[3]与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。

1 资料与方法

1.1 研究资料

选取2004年01月-2006年12月江苏省南通市第一人民医院病理科116例乳腺癌患者，术前未接受化疗或放疗，患者均为女性；年龄35～81岁，平均56岁。按照WHO乳腺癌分类：浸润性导管癌101例，其他类型：包括浸润性小叶癌7例，黏液腺癌5例，髓样癌3例。TNM 分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期67例，Ⅲ期27例，Ⅳ期7例。116例乳腺癌患者中，腋窝淋巴结转移52例，无淋巴结转移64例。按照肿瘤的大小分为两组：≤2 cm患者48例，＞2 cm患者68例。

1.2 方法

本研究所用的免疫组织化学试剂鼠抗人单克隆抗体Kif2a（ab55383）购自美国Abcam公司，工作浓度（1∶80）。免疫组织化学采用SP染色法。评分标准：光镜下观察，40倍物镜镜下随机选取＞10个视野，每个视野＞200个细胞。根据细胞染色强度和阳性细胞数进行半定量。染色强度标准：无着色计0分，浅棕色计1分，中等度着色计2分，深棕色计3分。阳性细胞细胞数：无细胞阳性计0分，阳性细胞数1%～30%计1分，30%（不包含）～70%计2分，＞70%计3分。将2项分数累计，0分为阴性（-），1～3分为阳性（+），4～6分为强阳性（++）。Kif2a是正常细胞分裂所必需的重要因子，在正常组织中也有表达。在乳腺癌组织中表达4～6分。分为低表达组≤4分，高表达组5～6分。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 19.0统计软件，相关分析用Spearman法，Kaplan-Meier制做生存曲线，比较用Log-rankχ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌患者Kif2a的表达及N D情况

Kif2a在乳腺癌组织中的免疫组织化学法染色阳性细胞主要定位于细胞质，细胞核少量表达[4]。116例乳腺癌患者中Kif2a低表达46例，高表达70例。116例乳腺癌患者中，腋窝淋巴结转移52例。按ND分为：ND=0组64例、ND≤40%组34例、ND＞40%组18例。见图1。

2.2 乳腺癌患者Kif2a、N D与患者临床病理特征的相关性

Kif2a与乳腺癌TNM分期、HER-2表达呈正相关（P＜0.05）。ND与乳腺癌TNM分期、HER-2表达呈正相关（P＜0.05）。而两者与年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学类型及内分泌表型[雌激素受体（estrogen receptor，ER）、孕激素受体（progesterone receptor，PR）]无关（P＞0.05）。见表 1。

2.3 乳腺癌患者Kif2a与N D的相关性

Kif2a在116例乳腺癌低表达组中淋巴结转移发生率为 13.0%（6/46），高表达组为 65.7%（46/70）。Kif2a的表达随着乳腺癌ND的增加，而表达增强，表明Kif2a在乳腺癌中的表达水平与ND呈正相关（P＜0.05）。见表 2。

2.4 乳腺癌患者Kif2a、N D与预后的相关性

对所有患者出院即开始随访，术后3年内随访1次/3个月，4～6年内随访1次/6个月，6年后随访1次/年。随访结果终点为死亡，次要终点为复发和转移。随访截止时间为2016年12月31日。本组患者随访32～143个月，平均103个月，随访98例，随访率为 84.5%（98/116），失访率为 15.5%（18/116）。患者5年生存率为86.7%（85/98），10年生存率为68.4%（67/98）。采用Log-rankχ2检验和Kaplan-Meier生存曲线，分析乳腺癌患者Kif2a、ND与预后的关系，结果显示，乳腺癌患者Kif2a低表达组5和10年的生存率分别为 93.5%（43/46）和 84.8%（39/46）；高表达组5和10年的生存率分别为85.7%（60/70）和64.3%（45/70），表明Kif2a表达越强，无瘤生存时间越短（χ2=5.154，P=0.023）（见图 2）。ND=0 组、ND≤40%组及ND＞40%组5年总生存率分别为98.4%（63/64）、82.4%（28/34）和 66.7%（12/18），10 年总生存率分别为 89.1%（57/64）、67.6%（23/34）和22.2%（4/18），表明随着ND的增加，无瘤生存时间越短（χ2=35.492，P=0.000）（见图 3）。

表1 乳腺癌患者临床病理特征与Kif2a、N D的关系 例

表2 乳腺癌患者Kif2a与N D的相关性 例

图2 乳腺癌患者Kif2a表达对预后生存的影响

图3 乳腺癌患者N D对预后生存的影响

3 讨论

Kif2a是微管驱动蛋白Kinesin-13中的一个亚家族，其包括 Kif2a、Kif2b 及 Kif2c/MCAK 3[5]。驱动蛋白Kif2a具有微管解聚酶的功能，参加细胞的生长、发育，有丝分裂活动，染色体移动，细胞膜运输，神经细胞轴突的生长、延伸，以及其他过程[6]。驱动蛋白与肿瘤的密切关系也逐渐引起人们的注意。驱动蛋白在细胞的有丝分裂过程中过度表达，其行为使微管动力增加，加快并促进细胞的有丝分裂和增殖。有研究表明，Kinesin-13家族中的其他成员Kif2b、Kif2c/MCAK 3与胃癌、乳腺癌有关[7]。但Kif2a与肿瘤的相关研究国内外较少报道。本研究检测Kif2a在116例乳腺癌患者癌组织中的表达情况。结果显示，乳腺癌组织中Kif2a的表达与患者TNM分期、HER-2的阳性表达及ND呈正相关，与WANG[4]和ZHANG等[8]对Kif2a在恶性肿瘤中的研究相一致。Kif2a是细胞生长、发育，有丝分裂及细胞增殖所必须的因子，其表达的强度显示细胞增殖的速度，所以其在不同细胞周期中呈不同程度的表达。Kif2a在有腋窝淋巴结转移的患者和原发乳腺癌组织中表达升高，并且原发乳腺癌组织中高表达患者的5年生存率为85.7%（60/70），而低表达的生存率为 93.5%（43/46），高表达患者的5年生存率远低于低表达者。研究结果提示，高表达的肿瘤组织促进肿瘤发生、转移，发生转移的患者，复发的可能大大提高，从而影响患者的生存质量，从生物学角度上直接影响细胞的增殖，参与细胞有丝分裂。驱动蛋白Kif2a不仅与肿瘤细胞的有丝分裂、增殖密切相关，而且与肿瘤的远处转移密切相关，可以把其看作是一个癌基因。并且发现，随着Kif2a阳性表达的增强，患者5和10年的无瘤生存时间越短。提示Kif2a基因可作为乳腺癌预后判断的指标，与患者的预后密切相关。因此，Kif2a有望成为乳腺癌早期诊断和预测乳腺癌预后的生物分子。

乳腺癌是一种系统性疾病，转移或复发是多种因素共同作用的结果，乳腺癌预后关系与各临床病理特征的报道结果不尽相同[9-10]。研究证实，随着腋窝淋巴结清扫数目的增加，腋窝淋巴结分期的准确性越高，清扫的淋巴结数目越多，发现淋巴结转移的机会越大[11]。本研究结果显示，乳腺癌组织中ND与TNM分期、HER-2的阳性表达呈正相关，与其他临床病理因素无关。并发现随着ND的增加，患者无瘤生存时间越短。提示ND预示着患者的预后不良和低生存率，进一步提示ND在乳腺癌的发生、发展过程中的重要作用，对临床的治疗和预后评估具有重要意义。本研究结果与YAMASHITA等[12]对382例胃癌样本的研究报道结果一致，因此笔者推断ND可作为乳腺癌预后的参考评估标准，ND＞40%提示预后不良。因此，乳腺癌患者的ND能够预测癌的临床分期，以及有效预测乳腺癌患者的预后。

综上所述，驱动蛋白Kif2a、ND可能是乳腺癌患者预后的独立因素，其对判断乳腺癌患者的预后具有一定价值。

[1] TORRE L A,BRAY F,SIEGEL R L,et al.Global cancer statistics,2012[J].CA Cancer J Clin,2015,65(2):87-108.

[2] HONG W,DONG E.The past,present and future of breast cancer research in China[J].Cancer Lett,2014,351(1):1-5.

[3] 李世君,王月华,常苗苗,等.淋巴结转移密度与乳腺浸润性导管癌预后的关系[J].临床与实验病理学杂志,2016,32(3):268-271.

[4] WANG J,MA S,MA R,et al.KIF2a silencing inhibits the proliferation and migration of breast cancer cells and correlates with unfavorable prognosis in breast cancer[J].BMC Cancer,2014,14:461.

[5] FAN X,WANG X,ZHU H,et al.KIF2a overexpression and its association with clinicopathologic characteristics and unfavorable prognosis in colorectal cancer[J].Tumour Biol,2015,36(11):8895-8902.

[6] GANEM N J,COMPTON D A.The Kini kinesin Kif2a is required for bipolar spindle assembly through a functional relationship with MCAK[J].J Cell Biol,2004,166(4):473-478.

[7] STEVENS K N,WANG X,FREDERICKSEN Z,et al.Evaluation of associations between common variation in mitotic regulatory pathways and risk of overall and high grade breast cancer[J].Breast Cancer Res Treat,2011,129(2):617-622.

[8] ZHANG Q,ZHANG W,ZHANG J,et al.Aberrant Kif2a and Ki67 expression predicts poor survival in laryngeal squamous cell carcinoma[J].Auris Nasus Larynx,2016,43(4):433-439.

[9] 吕铮,王惊华,康丽花,等.354例T1期乳腺癌患者的淋巴结转移和预后分析[J].中华肿瘤杂志,2014,36(5):382-385.

[10] 王芳,郝春芳,贾勇圣,等.205例初治转移性乳腺癌的临床病理特点和生存分析[J].中国肿瘤临床,2014,41(17):1103-1107.

[11] KURU B.Prognostic significance of total number of nodes removed,negative nodes removed,and ratio of positive nodes to removed nodes in node positive breast carcinoma[J].Eur J Surg Oncol,2006,32(10):1082-1088.

[12] YAMASHITA K,OOKI A,SAKURAMOTO S,et al.Lymph node metastasis density (ND)-factor association with malignant degree and ND40 as non-curative factor in gastric cancer[J].Anticancer Res,2008,28(1B):435-441.

（童颖丹 编辑）

Prognostic value of Kif2a and lymph node metastasis density in breast cancer

Jin-feng Qian,Qi-chang Yang,Xiao-juan Zhang,Yan Zhu
(Department of Pathology,the First People's Hospital of Nantong,Nantong,Jiangsu 226001,China)

R737.9

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.23.008

1005-8982（2017）23-0043-04

2016-02-02

朱燕，E-mail：zhuyan85129087@163.com；Tel：0513-85061087