张子言,裴辰,徐之勇,陈新武,张艳红,马金友,余燕

（河南科技学院动物科技学院,河南新乡453003）

IBDV致雏鸡非免疫器官损伤的动态变化

张子言,裴辰,徐之勇,陈新武,张艳红,马金友,余燕

（河南科技学院动物科技学院,河南新乡453003）

研究旨在探究传染性法氏囊病毒（IBDV）对雏鸡非免疫器官肝脏、腺胃、肾脏、十二指肠、回肠等损伤的动态变化.用实验室保存的IBDV毒株（number：19951128）感染雏鸡,分别在感染后1、2、3、4、5、7 d取雏鸡肝脏、腺胃、肾脏、十二指肠、回肠,通过石蜡切片、HE染色,观察其病理组织学变化并进行组织学评分.结果显示：雏鸡的肝脏、肾脏、腺胃、十二指肠等器官在IBDV感染第4天损伤最为严重,表现为肝脏肝索结构不清晰,肝细胞水泡变性,胞核溶解、浓缩和破碎现象较多,组织学评分为4分；腺胃多数腺上皮细胞脱落,个别腺细胞胞核浓缩,组织学评分为4分；肾脏炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞肿胀,管腔变小,组织学评分为4分；十二指肠小肠绒毛上皮细胞界限不清晰,固有层胞质溶解呈空泡,组织学评分为3分；而回肠受IBDV的影响较小,仅在IBDV感染第3天出现中央乳糜管区充血、上皮细胞界限不清等现象,组织学评分为1分.至IBDV感染第7天时,雏鸡各组织损伤基本恢复.根据各组织受损情况综合判断雏鸡感染IBDV后非免疫器官损伤的程度依次为：肝脏＞腺胃＞肾脏＞十二指肠＞回肠.

雏鸡；IBDV；非免疫器官；损伤

Abstract:This paper was performed to observe the injury changes of non-immune organs such as liver, proventriculous,kidney,duodenum,ileum in chickens infected with infectious bursal disease virus（IBDV）.Chickens were infected with the strain of IBDV saved in laboratory（number：19951128）.Liver,proventriculous,kidney, duodenum,ileum were selected on the day of 1,2,3,4,5,7 d after chickens infected with IBDV.Histopathological changes were observed by paraffin section and HE staining and evaluated by histological score.The results showed that the injury of liver,proventriculous,kidney,and duodenum were the most after 4 d of chickens infected with IBDV, showed that the structure of hepatic cord in liver was unclear,vacuolar degeneration of hepatic cells,and lysis, concentration and fragmentation of nucleus.The histological score was 4.Lots of glandular epithelial cells of proventriculous were detaching and a few of nucleus became concentration.The histological score was 4.In kidney, inflammatory cells were infiltrating,renal tubular epithelial cells were swelling,renal tubular became narrow.The histological score was 4.The epithelial cells lines of villi in duodenum were not clear.Cells in lamina propria of villi were serious damaged with cytoplasm dissolving like vacuoles.The histological score was 3.While the effect of IBDV on ileum was small,only central chyliferous vessel congestion and the lines of epithelial cells were not clear after 3 d of chickens infected with IBDV.The histological score was 1.Until 7 d after IBDV infected chickens,the injury of thetissues recovered.Together,the degree of injury in these non-immune organs after chicken infected with IBDV was liver＞proventriculous＞kidney＞duodenum＞ileum.

Key words:chicken；IBDV；non-immune；pathologic histology

传染性法氏囊病（infectious bursal disease,IBD）是由传染性法氏囊病病毒（IBDV）引起的一种急性、高度接触传染性疾病.IBDV主要侵害雏鸡法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体等免疫器官[1-5],在携带IgM且未成熟的B淋巴细胞[6]、正在增殖的B淋巴细胞[7]或成熟的B淋巴细胞[8]中复制引起细胞凋亡,进而导致组织结构遭到破坏.有研究表明,雏鸡感染IBDV后,法氏囊、脾脏和盲肠扁桃体等免疫器官损伤的程度会随着感染时间的延长呈现规律性变化,如雏鸡感染IBDV 3 d、4 d时法氏囊、脾脏损伤最为严重,5 d以后病变减轻并开始修复[1-2]；盲肠扁桃体在2 d和3 d时病变最为严重,在4 d时病变减轻,6～8 d时病变基本消失[3].由此可见,不同的组织受损伤的程度与修复的速度不同,这与该组织内侵染病毒粒子的多少和存留的时间有关[9-11].IBDV不但在免疫器官B淋巴细胞中复制,引起组织损伤,同时该病毒还能造成非免疫器官内网状细胞、巨噬细胞、异嗜细胞和结缔组织细胞凋亡,进而破坏该组织器官的结构[12].然而有关IBDV感染后雏鸡非免疫器官损伤的发展规律目前还缺乏较为详尽的研究.本试验采用组织切片、HE染色技术,对IBDV感染后不同时间点雏鸡肝脏、肾脏、腺胃、十二指肠、回肠等进行病理组织学观察,分析该病毒对这些组织损伤的动态变化,为IBDV造成雏鸡机体损害提供更多的基础资料.

1 材料与方法

1.1 动物处理

1日龄白来航健康雏公鸡150只（新乡市大用种鸡孵化厂）,置于河南科技学院实训中心饲养室喂养,饲养到15日龄时随机挑选10只雏鸡翅静脉采血,分离血清后应用琼脂扩散法[13]测其母源抗体水平.检测母源抗体消失后用实验室保存的IBDV（编号：19951128）稀释到每只雏鸡感染量为200 μL,于19日龄分别通过点眼（50 μL）、滴鼻（50 μL）和肛门吸收（100 μL）感染雏鸡70只,对照组（70只）使用稀释病毒的灭菌PBS（pH=7.36）处理.感染组和对照组分别饲养于不同房间,每笼10只.

1.2 组织取材与切片制作

分别在雏鸡感染的第1、2、3、4、5、7天,每组各取6只鸡称质量,按体质量100 mg/100 g用量乌拉坦麻醉,然后颈椎脱臼处死,取肝脏、腺胃、肾脏、十二指肠、回肠等,用质量分数为0.75%的生理盐水冲洗干净,用滤纸吸去多余的水分置于质量分数为4%的多聚甲醛磷酸缓冲液（pH=7.4）中固定,采用石蜡切片、HE染色制作组织切片.每只鸡选取5张切片,利用Olympus显微照相系统拍照观察.

1.3 组织病理损伤评分标准的制定

各组织的病理损伤评分参照Williams等[14]对IBDV超强毒株（vvIBDV）急性期感染的病理学评价系统,并做一定的修改,标准如下：

肝脏：0分,肝脏组织结构正常；1分,肝索界线清晰,肝细胞变性,有充血淤血现象；2分,肝索界线不清晰,肝细胞水泡变性,充血淤血现象明显；3分,肝索界线不清晰,肝细胞水泡变性,少量胞核出现溶解、浓缩、破碎现象；4分,肝索界线不清晰,肝细胞水泡变性,发生溶解、浓缩、破碎现象的胞核增多.

腺胃：0分,腺胃组织结构正常；1分,少量腺细胞脱落,细胞质着色浅；2分,腺细胞脱落较多,并进入腺小管腔,胞核着色浅；3分,腺细胞大量脱落,胞质溶解,胞核碎裂、固缩,有内容物渗入腺小管腔.

肾脏：0分,肾脏组织结构正常；1分,肾小叶中有炎性细胞浸润；2分,大量炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞变性；3分,大量炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞大量变性,胞质溶解；4分,肾脏组织结构疏松,肾小管上皮细胞脱落、变性、坏死,胞质溶解,肾小囊腔变窄.

十二指肠：0分,十二指肠结构正常；1分,胞质溶解；2分,中央乳糜管区淋巴细胞增多,胞质溶解；3分,小肠绒毛上皮细胞之间界限不清,中央乳糜管区淋巴细胞增多,胞质溶解；4分,小肠绒毛上皮细胞之间界限不清,中央乳糜管区淋巴细胞增多,小肠绒毛固有层胞质溶解,有充血现象.

回肠：0分,回肠结构正常；1分,胞质溶解；2分,胞质溶解,上皮细胞界线模糊；3分,中央乳糜区充血,上皮细胞界线不清,小肠绒毛固有层胞质溶解.

2 结果与分析

2.1 肝脏病理变化

用光学显微镜观察IBDV感染的雏鸡肝脏,IBDV感染1 d时,肝索界限不清晰,肝细胞肿胀,水泡变性,肝血窦变窄（图1A）.根据组织病理损伤评分标准,评为1.5分（表1）.IBDV感染2 d,肝索界限不清晰,肝细胞水泡变性,淤血充血现象明显（图1B）.根据组织病理损伤评分标准,评为2.0分（表1）.IBDV感染3 d,观察到肝小叶的中央静脉出现不同程度扩张,有浆液渗出,且中央静脉内皮细胞脱落,肝血窦中红细胞数量减少,个别的肝细胞核溶解、浓缩或破碎（图1C）.根据组织病理损伤评分标准,评为3.0分（表1）. IBDV感染4 d,肝脏中央静脉扩张恢复正常,肝细胞轮廓出现,但胞核溶解、浓缩、破碎的现象增多（图1D）.根据组织病理损伤评分标准,评为4.0分（表1）.IBDV感染5 d,肝细胞间界线清楚,肝索出现,与肝窦的界线逐渐清晰,切片中可见不规则的再生肝细胞出现（图1E）.根据组织病理损伤评分标准,评为1.0分（表1）.IBDV感染7 d,肝细胞细胞核明显,胞质内脂滴出现,肝索和肝血窦之间界限清晰,肝脏结构基本恢复正常（图1F）.根据组织病理损伤评分标准,评为0分（表1）.

图1 IBDV感染后不同时间点雏鸡肝脏的病理组织学观察Fig.1 Pathological histologyofliver at different time points after chicken infected with IBDV

表1 感染IBDV后各组织的病理损伤评分值Tab.1 Pathological injuryscore ofeach tissue after infected with IBDV

2.2 腺胃病理变化

用光学显微镜观察IBDV感染的腺胃,IBDV感染1 d时,毛细血管充血,腺胃腺小管的腺细胞稀疏,腺腔内有分泌物（图2A）.根据组织病理损伤评分标准,评为1.5分（表1）.IBDV感染2 d时,腺胃腺细胞间界线不清楚,细胞核着色变浅（图2B）.根据组织病理损伤评分标准,评为2.0分（表1）.IBDV感染3 d时,腺胃腺细胞萎缩,间隙变大,排列疏松,腺腔变大（图2C）.根据组织病理损伤评分标准,评为3.0分（表1）.IBDV感染4 d时,腺胃腺上皮细胞脱落数量较多,且进入腺小管腔（图2D）.根据组织病理损伤评分标准,评为4.0分（表1）.IBDV感染5 d时,腺胃腺组织结构逐渐恢复正常,但个别腺细胞胞核浓缩（图2E）.根据组织病理损伤评分标准,评为2.5分（表1）.IBDV感染7 d时,观察到腺胃组织结构已经基本恢复正常（图2F）.根据组织病理损伤评分标准,评为0分（表1）.

图2 IBDV感染后不同时间点雏鸡腺胃的病理组织学观察Fig.2 Pathological histologyofglandular stomach at different time points after chicken infected with IBDV

2.3 肾脏病理变化

用光学显微镜观察IBDV感染的雏鸡肾脏,IBDV感染1 d时,肾脏血液中淋巴细胞增多,肾小叶中有炎性细胞渗出,胞质稍溶解,肾小管上皮细胞出现轻微的水泡变性（图3A）.根据组织病理损伤评分标准,评为1.0分（表1）.IBDV感染2 d时,小动脉扩张充血,有淋巴细胞和吞噬细胞浸润,肾小管上皮细胞水泡变性,胞质稍溶解（图3B）.根据组织病理损伤评分标准,评为2.0分（表1）.IBDV感染3 d时,肾脏肾小叶中有大量炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞增生,肾小管间界线逐渐清楚,肾小管腔并无异物（图3C）.根据组织病理损伤评分标准,评为3.0分（表1）.IBDV感染4 d时,肾脏肾小叶中炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞肿胀,管腔变小甚至阻塞（图3D）.根据组织病理损伤评分标准,评为4.0分（表1）.IBDV感染5 d时,肾脏组织中有极少量淋巴细胞浸润,肾小管和肾小囊逐渐恢复正常（图3E）.根据组织病理损伤评分标准,评为1.0分（表1）.IBDV感染7 d时,肾脏组织的结构已经基本恢复正常（图3F）.根据组织病理损伤评分标准,评为0分（表1）.

图3 IBDV感染后不同时间点雏鸡肾脏的病理组织学观察Fig.3 Pathological histologyofkidneyat different time points after chicken infected with IBDV

2.4 十二指肠病理变化

用光学显微镜观察IBDV感染的十二指肠,IBDV感染雏鸡1 d,十二指肠上皮细胞组织结构清楚,在黏膜上皮中可观察到散在分布的淋巴细胞,小肠绒毛中黏膜上皮与固有层分界明显（图4A）.根据组织病理损伤评分标准,评为0分（表1）.IBDV感染雏鸡2 d,十二指肠肠上皮之间分界不清晰,少量肠上皮细胞出现脱落,小肠绒毛边界不清晰,中央乳糜管出现轻微充血现象（图4B）.根据组织病理损伤评分标准,评为1.0分（表1）.IBDV感染雏鸡3 d,观察到十二指肠绒毛上皮细胞之间界限不清,有轻微的胞质溶解现象；中央乳糜管严重充血,固有层内细胞部分胞质溶解（图4C、F）.根据组织病理损伤评分标准,评为2.0分（表1）.IBDV感染雏鸡4 d,十二指肠小肠绒毛固有层中细胞损伤严重,胞质溶解呈空泡,上皮细胞界限不清晰,部分细胞胞质溶解（图4D、G）.根据组织病理损伤评分标准,评为3.0分（表1）.IBDV感染雏鸡5 d和7 d,十二指肠肠绒毛上皮细胞界线清晰,形态基本恢复正常,固有层细胞清晰完整（图4E、H）.根据组织病理损伤评分标准,评为0分（表1）.

图4 IBDV感染后不同时间点雏鸡十二指肠的病理组织学观察Fig.4 Pathological histologyofduodenumat different time points after chicken infected with IBDV

2.5 回肠病理变化

用光学显微镜观察IBDV感染的雏鸡回肠,IBDV感染雏鸡1 d时,细胞组织结构清楚,没有明显的病理组织变化（图5A）.根据组织病理损伤评分标准,评为0分（表1）.IBDV感染雏鸡2 d,回肠细胞组织结构清楚,在黏膜上皮中可观察到散在分布的淋巴细胞,小肠绒毛中央乳糜区出现充血现象,少量小肠绒毛上皮细胞溶解（图5 B）.根据组织病理损伤评分标准,评为0.5分（表1）.IBDV感染雏鸡3 d,回肠中央乳糜管区充血,上皮细胞界限不清,部分细胞胞质溶解（图5C）.根据组织病理损伤评分标准,评为1分（表1）.IBDV感染雏鸡4 d、5 d、7 d,回肠上皮细胞之间界限清晰,绒毛固有层结构正常（图5D）.根据组织病理损伤评分标准,评为0分（表1）.

图5 IBDV感染后不同时间点雏鸡回肠的病理组织学观察Fig.5 Pathological histologyofileumat different time points after chicken infected with IBDV

3 结论与讨论

IBDV感染雏鸡后,非免疫器官的受损程度依次为：肝脏＞腺胃＞肾脏＞十二指肠＞回肠.组织器官的损伤程度与该组织中病毒粒子的多少和存留时间的长短有关.

IDBV虽然是噬淋巴器官病毒,但在非淋巴器官肝脏、腺胃、肾脏、肠道、肺脏等器官也检出IBDV粒子并呈现出一定的消长规律[14],然而,有关IBDV对雏鸡非免疫器官的病理损伤缺乏较为详尽的报道.本试验对IBDV感染导致的雏鸡非免疫器官肝脏、腺胃、肾脏、十二指肠和回肠等的病理损伤进行观察,发现雏鸡感染IBDV的第3、4天,非免疫器官的损伤也最为严重,然后逐渐减轻直至完全恢复,本试验的结果与李春生等[15]、邓治邦等[16]、王兴赫[17]的相关研究结果基本相符.陈创夫等[14]研究发现,IBDV病毒粒子在雏鸡非免疫器官肝脏、肾脏、腺胃等器官中最早6 h就可以检测到,24～168 h最多,216 h变少直至消失.研究还发现,在非免疫器官中,肝脏的损伤最为严重,其次是腺胃、肾脏,而十二指肠和回肠受损较轻.前人的研究也发现[10-11],在IBDV感染的雏鸡非免疫器官中肝脏的含毒量最高,持续的时间也最长,而在脑、心脏等器官并未发现病毒粒子.以上的研究结果说明组织损伤的程度可能和病毒粒子的存留时间有一定的关系.

[1]刘晓晓,余燕,邵营格,等.雏鸡感染IBDV后法氏囊组织结构的动态变化[J].河南科技学院学报（自然科学版）,2015, 43（4）：40-43.

[2]于品,佘锐萍,丁叶,等.兔小囊肽对vvIBDV感染SPF鸡的脾脏病理损伤保护及细胞免疫调节作用[J/OL].中国科技论文在线,2011[2017-04-11].http：//www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201101-864.

[3]赵莹,李文,陶换,等.IBDV感染雏鸡盲肠扁桃体的病理组织学变化[J].河南科技学院学报（自然科学版）,2016,44（3）：43-46.

[4]WANG D C,XIONG J M,SHE R P,et al.Mast cell mediated inflammatory response in chickens after infection with very virulent infectious bursal disease virus[J].VeternaryImmunologyand Immunopathology,2008,124（1）：19-28

[5]刘爵,韦莉,姚炜光,等.鸡传染性法氏囊病超强毒感染后SPF鸡免疫器官病理学观察[J].畜牧兽医学报,2002,33（4）：371-376.

[6]陈家丽,蒋守群.鸡传染性法氏囊病及其免疫抑制研究进展[J].养禽与禽病防治,2012（5）：2-4.

[7]郭太杰.传染性法氏囊病的研究概况[J].黑龙江畜牧兽医,2010（22）：86-87.

[8]CHEN L,RAN MJ,SHAB X X,et al.BAFF enhances B-cell-mediated immune response and vaccine-protection against a very virulent IBDVin chicken[J].Vaccine,2009,27（9）：1393-1399.

[9]张燕欣.IBDV-TJ-hg在鸡体内主要器官动态分布规律的研究[D].天津：天津农学院,2013.

[10]佟美娇.IBDV感染SPF雏鸡免疫器官细胞凋亡及相关基因表达变化[D].哈尔滨：东北农业大学,2013.

[11]龙塔,邱震东,宋文成.实验性鸡传染性法氏囊病病毒在体内分布及其消长规律[J].兽医大学学报,1992,12（2）：190-191

[12]TANIMURA N,SHARMA J M.Appearance of T cells in the bursa of fabricius and cecal tonsils during the acute phase of infectious bursal disease virus infection in chickens[J].Avian Diseases,1997,41（3）：638-645.

[13]罗俊,肖志军,李学武,等.试纸法与琼扩法检测鸡IBD母源抗体的比较试验[J].中国家禽,2002,24（17）：8-10.

[14]陈创夫,马正海,喻华英.实验性鸡法氏囊病的病毒在体内分布及其消长规律研究[J].塔里木大学学报,1997（2）：5-10.

[15]李春生,匡宝晓,刘思当,等.鸡传染性法氏囊病的病理组织学观察[J].中国兽医杂志,1994,20（5）：33-34.

[16]邓治邦,周红.实验性鸡法氏囊病临床症状与病理学观察[J].畜禽业,2004（8）：25-26.

[17]王兴赫.IBDV感染SPF雏鸡主要器官组织病理变化及病毒的体内分布[D].哈尔滨：东北农业大学,2013.

（责任编辑：卢奇）

Changes of non-immune organ injury in chickens induced by IBDV

ZHANG Ziyan,PEI Chen,XU Zhiyong,CHEN Xinwu,ZHNG Yanhong,MA Jinyou,YU Yan
（College ofAnimal Science and VeterinaryMedicine,Henan Institute ofScience and Technology, Xinxiang453003,China）

S858.31

A

1008-7516（2017）04-0031-06

10.3969/j.issn.1008-7516.2017.04.006

2017-05-22

河南省高校科技创新人才项目（13HASTIT006）；河南省科技攻关项目（162102110038）；新乡市科技攻关项目（CXGG16026）

张子言（1997—）,女,河南焦作人,本科生.

余燕（1972—）,女,河南信阳人,博士,副教授.主要从事动物组织结构与致病机理研究.