陈敬祥，程 杰，林 同

(华南农业大学 林学与风景园林学院，广州 510640)

松墨天牛中性肽链内切酶2基因的鉴定与表达

陈敬祥，程 杰，林 同

(华南农业大学 林学与风景园林学院，广州 510640)

为了探讨M13家族中的中性肽链内切酶2基因在昆虫中的表达特性，以松墨天牛为研究对象，从cDNA文库中筛选到松墨天牛中性肽链内切酶2基因，命名为 MaNep2 (GenBank:KU245762)。该序列长为2 471 bp，其中编码序列为2 280 bp，共编码759个氨基酸。由此预测的蛋白质二级结构主要由α-螺旋与无规则卷曲组成，其次是延伸链与β-转角。 MaNep2基因编码蛋白定位于细胞质，为跨膜蛋白，跨膜区长度为23个氨基酸(C25LTLSTAVAFVIGISLVVALATV47)，并存在一个低复杂度区域：I423SAGSLSIASGAL435。通过DNAMAN软件比对发现MaNep2与山松甲虫和赤拟谷盗同源性最高，为82%,且存在4个保守结构域序列：NAFY(553-556)、HEITH(594-598)、ENIAD(656-660)、CXXW(756-759)；用MEGA4.0构建系统发育树，显示松墨天牛与山松甲虫处在同一分支。qPCR分析表明： MaNep2的表达与松墨天牛的变态发育相关，各虫态不间断表达，幼虫期表达表现先上升后下降，化蛹期间表达表现为先下降后上升，羽化期间表达表现为先上升后下降，并在初羽化的成虫中表达量达到最大值；幼虫和成虫头部表达量最高，且在马氏管中均有表达；成虫的足、翅、触角和卵巢中也都有表达。

松墨天牛；中性肽链内切酶2；cDNA文库；RT-qPCR

松墨天牛(Monochamusalternatus)又名松天牛、松褐天牛，在中国大部分地方均有分布，是林业上重要的蛀干害虫，寄主主要包括黑松、马尾松、思茅松等。幼虫钻蛀衰弱树干和大枝条，取食其韧皮部与木质部，进而切断输导组织，使水分和养分运输受阻，造成树木成片枯死；……