何亚鹏，许信刚，付明哲，张 琪

(西北农林科技大学 动物医学院，陕西杨凌 712100)

猪种、牛种、羊种、绵羊种布鲁菌多重PCR检测方法的建立及应用

何亚鹏，许信刚，付明哲，张 琪

(西北农林科技大学 动物医学院，陕西杨凌 712100)

为建立在临床样本能够同时检测猪种、牛种、羊种、绵羊种布鲁菌的多重PCR方法，根据NCBI已收录的布鲁菌全基因，设计并合成4对特异性引物，通过优化多重PCR的反应条件，建立能够同时检测4种布鲁菌的多重PCR诊断方法。特异性试验结果表明，可以从4种布鲁菌以及 4 种细菌混合物中扩增出大小分别为276、494、733和976 bp的特异性条带，对照组的检测结果为阴性；敏感性试验结果表明，对4种病原菌基因组DNA的检出量为猪种32.2 pg、牛种21.3 pg、羊种27.5 pg、绵羊种43.2 pg；人工模拟感染样本检测结果表明，能从混合感染的病料中特异地检测出 4 种病原菌。应用该方法对 200 份临床奶山羊乳样进行检测，结果检出4份阳性。建立的多重PCR方法具有特异性强、敏感度高、稳定性好的特点，可以有效地检测 4 种布鲁菌的感染。

猪种布鲁菌；牛种布鲁菌；羊种布鲁菌；绵羊种布鲁菌；多重PCR

布鲁菌病是由布鲁菌(Brucella)引起的人畜共患传染病，严重危害经济发展和公共健康，世界动物卫生组织(OIE)将其列为B类重要传染病，中国将其列为二类传染病[1]。现已确定的布鲁菌有 7 个种(牛种、羊种、绵羊附睾种、猪种、犬种、沙林鼠种、海洋种)和20 个生物型[2]。布鲁菌对牛、羊和猪的危害巨大，感染牛的有牛种、羊种和猪种布鲁菌；感染山羊的有羊种、牛种布鲁菌；……