李博，胡君诚,金珊

(湖北大学生命科学学院，湖北 武汉 430062)

用CRISPR/CAS9系统构建原位表达dPit:GFP的果蝇品系

李博，胡君诚,金珊

(湖北大学生命科学学院，湖北 武汉 430062)

SLC20A2基因是Ⅲ型纳磷转运蛋白2(PiT2)的编码基因，PiT2可将无机磷从细胞外运送至细胞内.SLC20A2基因突变导致PiT2不能正常地将无机磷运送到细胞内，血液中的无机磷含量升高,磷和钙离子结合形成沉淀,堵塞血管.SLC20A2基因在果蝇中的同源基因是CG42575(dpit).本实验使用CRISPR/CAS9系统，构建原位表达dPiT:GFP的果蝇品系，将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)编码序列插入dpit基因末端，使果蝇表达dPiT:GFP融合蛋白.该融合蛋白可以被dPiT及GFP的抗体同时识别，通过荧光直接观察dPiT:GFP的位置，从而准确定位dpit，进而为dpit基因的功能研究提供基础.

果蝇；CRISPR/CAS9系统；SLC20A2；dpit

0 引言

Ⅲ型纳磷转运蛋白2(PiT2)是SLC20A2基因的表达产物，其主要功能有两个：从细胞外转运无机磷和作为逆转录病毒的受体.SLC20A2基因突变后，会导致PiT2合成受阻，血液中的无机磷酸盐含量升高.多余的磷酸盐可以和钙离子结合，形成沉淀，该过程是人类家族性基底节钙化发病的原因之一[1].目前，在哺乳动物中，PiT2的分布未能精确认知，这阻碍了PiT2的功能分析的进展.哺乳动物实验，周期较长，成本较高，不能快捷地获取结果.根据序列比对，SLC20A2基因在果蝇体内的同源基因为CG42575(dpit)，该基因位于三号染色体右臂上的68A7到68A8区域，编码 667个氨基酸，它编码的氨基酸与SLC20A2的一致性与相似性分别为39%和55%，dpit的表达位置对该蛋白的功能研究具有重要意义.本实验用CRISPR/ CAS9技术构建了内源性表达的dPiT:GFP复合……