韩 超，蔡灵芝，毛 倩，李燕军，谢希贤

(1.代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室，天津 300457；2.天津科技大学 生物工程学院，天津 300457)

大肠杆菌生产莽草酸的基因工程菌构建

韩 超1,2，蔡灵芝1,2，毛 倩1,2，李燕军1,2，谢希贤1,2

(1.代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室，天津 300457；2.天津科技大学 生物工程学院，天津 300457)

莽草酸是芳香族氨基酸合成中的重要中间代谢物，可用于多种药物的化学合成.在代谢工程理论的指导下，构建积累莽草酸的高产菌株.通过构建敲除编码莽草酸激酶的基因aroL与aroK的菌株阻断莽草酸的代谢；通过构建敲除编码奎尼酸/莽草酸脱氢酶的基因ydiB的菌株减少副产物的合成；同时通过构建人工操纵子过表达编码DAHP合酶、莽草酸脱氢酶、脱氢奎尼酸脱水酶和三脱氢奎尼酸合酶的基因aroG，aroE，aroD和aroB以强化莽草酸合成途径.最终得到E.coliSHIKΔaroLΔydiB菌株，摇瓶发酵能够积累莽草酸5.5 g/L.

莽草酸；莽草酸激酶；大肠杆菌；aroL；ydiB

莽草酸被广泛应用于生物碱、吲哚衍生物和手性药物等物质的化学合成.近年来，莽草酸因被用于合成抗禽流感药物达菲而成为研究热点[1-3].莽草酸市场价格高居不下，前景良好[4].目前，众多的研究者投身于达菲合成路线的改良，旨在提高合成效率、缓解供求紧张.

莽草酸的生产方式可分为植物直接提取法、化学合成法和微生物发酵法.对于微生物发酵法来说，微生物体内已经存在天然的莽草酸合成途径，只是产物积累较慢，且能积累莽草酸的物种有限，因而必……