胡唐玲 云云 徐志庆 +段强军 邵菁 汪天明 汪长中

[摘要]該文探讨白头翁汤正丁醇提取物（butyl alcohol extract of Baitouweng decoction，BAEB）对白念珠菌细胞膜的抑制作用。以Spot assay观察BAEB对白念珠菌细胞活性的影响；酶标仪检测BAEB干预后白念珠菌细胞内渗透压变化；荧光显微镜观察BAEB对白念珠菌细胞膜通透性的影响；高效液相检测白念珠菌细胞膜麦角甾醇的含量；qRTPCR法检测细胞膜麦角甾醇生物合成相关基因的表达。结果显示，256，512，1 024 mg·L-1BAEB干预下白念珠菌活性逐渐降低；512，1 024 mg·L-1BAEB组白念珠菌胞内甘油含量显著性增多（P<005），与白念珠菌胞内渗透压相关的基因HOG1分别下调91，93，55倍；512，1 024 mg·L-1BAEB组白念珠菌红色荧光细胞明显增多；1 024 mg·L-1BAEB干预后麦角甾醇峰面积为35884 95，有显著性差异（P<005）；1 024 mg·L-1BAEB干预组ERG1，ERG2，ERG3，ERG4，ERG5，ERG6，ERG10，ERG11，ERG13，ERG24，ERG25，ERG251，ERG26与UPC2 分别下调658，489，415，924，341，984，308，750，553，590，245，325，198，1007倍。BAEB可通过抑制麦角甾醇及其生物合成相关基因的表达，进而抑制白念珠菌细胞膜完整性。

[关键词]白头翁汤正丁醇提取物；白念珠菌；细胞膜；麦角甾醇

Butyl alcohol extract of Baitouweng decoction inhibits

Candida albicans cell membrane

HU Tangling 1，2， YUN Yun1，2， XU Zhiqing 1，2， DUAN Qiangjun 1，2， SHAO Jing 1，2，

WANG Tianming 1，2， WANG Changzhong 1，2*

（1Institute of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine， Anhui University of

Traditional Chinese Medicine， Hefei 230038， China；

2Institute of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine， Anhui Academy of

Traditional Chinese Medicine， Hefei 230038， China）

[Abstract]To study the inhibitory effect of butyl alcohol extract of Baitouweng decoction（BAEB） on Candida albicans cell membrane The effects of BAEB on the activity of C albicans were observed by Spot assay The changes of intracellular osmotic pressure of C albicans after BAEB intervention were detected by microtiter plate reader The effect of BAEB on cell membrane permeability of C albicans were observed by fluorescence microscopy The content of ergosterol in C albicans cell membrane was detected by high performance liquid chromatography， and the expression of ergosterol biosynthesis related genes in cell membrane was detected by qRTPCR The results showed that the activity of C albicans was significantly decreased in 256， 512 and 1 024 mg·L-1 BAEB group The intracellular glycerol content of C albicans was significantly increased in 512 and 1 024 mg·L-1 BAEB group（P<005） The gene HOG1 associated with intracellular osmotic pressure of C albicans was downregulated by 91， 93 and 55 times， respectively C albicans with red fluorescent were increased significantly in 512 and 1 024 mg·L-1 BAEB group The peak area of ergosterol in the 1 024 mg·L-1 BAEB group was 35884 95， with a significant difference（P<005）； ERG1， ERG2， ERG3， ERG4， ERG5， ERG6， ERG10， ERG11， ERG13， ERG24， ERG25， ERG251， ERG26 and UPC2 were downregulated by 658， 489， 415， 924，341， 984， 308， 750， 553， 590， 245， 325，198 and 1007 times respectively in 1 024 mg·L-1 BAEB group The study indicated that BAEB could inhibit ergosterol and its biosynthesis related genes expression in the cell membrane and inhibit the activity of C. albicans.endprint

[Key words]butyl alcohol extract of Baitouweng decoction； Candida albicans； cell membrane； ergosterol

白念珠菌是最常见的条件致病性真菌，常存在于口咽、胃肠道和阴道黏膜表面。正常情况下，白念珠菌一般不会引起人类疾病，但当宿主局部微环境失调或黏膜屏障受损时， 可造成黏膜感染，引起鹅口疮、外阴阴道念珠菌病、间擦疹等疾病[12]，严重者可侵入血管内引起播散性感染[35]。

现有的抗真菌西藥毒副作用大，易耐药[69]。本课题组研究发现中药复方白头翁汤（由白头翁、黄柏、黄连、秦皮组成）正丁醇提取物（butyl alcohol extract of Baitouweng decoction，BAEB）毒性低且具有显著抑制白念珠菌的作用[1012]，但其作用机制不详，本实验以白念珠菌的基本结构细胞膜为切入点，以探讨BAEB对白念珠菌的抑制作用机制。

1材料

11菌株与药物

白念珠菌标准株SC5314由第二军医大学药学院姜远英教授惠赠。白头翁汤按白头翁Pulsatilla chinensis （Bge） Regel 15 g、黄柏Phellodendron chinense Schneid 12 g、黄连Coptis chinensis Franch 6 g、秦皮Fraxini Cortex 12 g组成，购于安徽中医药大学第一附属医院中药房，经安徽中医药大学药学院刘守金教授鉴定。……