王 来， 楚方旋， 耿慧霞， 董瑞瑞， 祝世功

(河南大学1生命科学学院，2护理与健康学院， 河南 开封 475001；3北京大学医学部生理与病理生理学系， 北京 100191)

CREB-shRNA对氧糖剥夺/复氧皮层神经元线粒体形态和凋亡的影响*

王 来1， 楚方旋1， 耿慧霞2△， 董瑞瑞3， 祝世功3△

(河南大学1生命科学学院，2护理与健康学院， 河南 开封 475001；3北京大学医学部生理与病理生理学系， 北京 100191)

目的： 探讨沉默CREB基因对氧糖剥夺/复氧神经元线粒体形态及细胞凋亡的影响。方法: 3条靶向CREB基因的shRNA片段插入慢病毒载体pLentiLox3.7(PLL)，与包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染293T细胞包装病毒颗粒后感染原代皮层神经元，Western blot检测CREB蛋白的沉默情况；分别用MitoTracker red、TUNEL和Western blot实验检测氧糖剥夺/复氧诱导CREB基因沉默后神经元的线粒体形态、细胞凋亡和Bcl-2、Bax的表达情况。结果: pLL-CREB-shRNA1为最有效的shRNA，其抑制皮层神经元CREB基因表达率高达80%。CREB基因沉默促进氧糖剥夺/复氧诱导的皮层神经元线粒体向点状、片段化形态改变，同时降低Bcl-2表达、促进Bax的表达并加重细胞凋亡(P<0.05)。结论: CREB-shRNA重组慢病毒载体可特异性抑制神经元CREB基因的表达，CREB基因沉默加重氧糖剥夺/复氧诱导的皮层神经元线粒体形态改变，促进细胞凋亡。

CREB基因; 重组慢病毒载体; 神经元; 氧糖剥夺/复氧; 线粒体

脑卒中患者约占所有心脑血管疾病患者的30%，具有较高的致残致死率，给家庭和社会带来巨大的心理和经济压力。缺血再灌注所致神经元损伤或凋亡是脑卒中患者重要的病理过程，目前主要有神经元的兴奋性毒性、钙离子超载、活性氧生成和炎症反应等多种机制阐释该过程的发生[1]。神经元以氧化磷酸化作为细胞能量的主要来源，因此，线粒体约占神经元细胞体积的1/3[2]。近年研究发现，神经元内线粒体形态、结构、生成和功能在缺血再灌注后发生异常，维护线粒体形态和功能的稳定可以降低神经元的凋亡[3-5]。……