贾亚楠， 李汝佳， 王可可， 雷 洪， 哈艳平， 王思思， 廖晓敏， 揭 伟， 申志华△

(广东医科大学基础医学院 1病理生理教研室， 2病理学系， 广东 湛江 524023； 3广东医科大学附属医院病理诊断与研究中心， 广东 湛江 524001)

受体酪氨酸激酶Axl高表达促进鼻咽癌临床进展*

贾亚楠1， 李汝佳2, 3▲， 王可可2, 3， 雷 洪2,3， 哈艳平2, 3， 王思思2, 3， 廖晓敏2, 3， 揭 伟2, 3， 申志华1△

(广东医科大学基础医学院1病理生理教研室，2病理学系， 广东 湛江 524023；3广东医科大学附属医院病理诊断与研究中心， 广东 湛江 524001)

目的： 探讨受体酪氨酸激酶anexelekto (Axl)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)中的表达及意义。方法: 采用免疫组化法检测78例NPC和32例鼻咽黏膜慢性炎中Axl的表达，分析Axl蛋白表达与NPC患者临床参数的相关性。常规培养NPC细胞，免疫荧光法检测不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z及C666-1中Axl的蛋白表达情况。应用Axl特异性抑制剂TP-0903处理CNE1和C666-1细胞，CCK-8实验检测细胞的活力，流式细胞术检测细胞周期的分布，qPCR检测Axl和增殖细胞核抗原(PCNA)的mRNA表达，Western blot检测Axl及p-Axl蛋白的表达。结果: Axl蛋白定位于胞膜和胞质。NPC中Axl高表达阳性率显著高于鼻咽黏膜慢性炎(P<0.01)。Axl高表达与患者年龄、性别及M分期无关，与临床分期、T分期和N分期呈正相关(P<0.05)。Axl在高分化CNE1细胞中低表达，在低分化CNE2Z细胞和未分化C666-1细胞中表达水平明显增高。TP-0903呈浓度和时间依赖性抑制NPC细胞的活性，2 nmol/L TP-0903即具有显著抑制效应，能阻滞细胞周期于G0期，在降低Axl活性的同时也显著抑制PCNA的表达。结论: Axl高表达可促进NPC的临床进展；TP-0903显著抑制NPC细胞的增殖，提示Axl可能在NPC靶向治疗中具有一定的价值。

鼻咽癌； Anexelekto； TP-0903； 细胞增殖； 细胞周期

材 料 和 方 法

1 主要抗体及试剂

兔抗人Axl和p-Axl (Tyr698+Tyr702+Tyr703)的 I 抗(北京博奥森)；鼠抗人增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)及GAPDH的I 抗(Cell signaling)；HRP-、FITC-、PE-标记的II抗(武汉三鹰)；免疫组化PV9000试剂盒及DAB试剂盒(北京中杉金桥)；TP-0903(纯度>98%；MCE)；RNA抽提试剂盒及逆转录试剂盒(Invitrogen)；实时荧光定量PCR试剂盒(Roche)；qPCR引物由上海生工公司合成；RPMI-1640培养基、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)均购自Hyclone；碘化丙啶(propidium iodide，PI)、RNaseA及DAPI染液(Sigma)；蛋白酶及磷酸酶抑制剂、RIPA缓冲液、BCA及CCK-8试剂盒(碧云天)；ECL发光剂及PVDF膜(Thermo Scientific)。

2 临床标本

78例NPC及32例鼻咽黏膜慢性炎(nasopharyngeal chronic inflammation，NPI)患者的石蜡包埋组织来自2014～2015年广东医科大学附属医院病理中心保存的标本。所……