万云鹏

慢性阻塞性肺疾病患者血清中CCL6的临床意义及相关性研究

万云鹏

目的通过测定慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）、慢性阻塞性肺疾病稳定期COPD患者的血清中Clara细胞分泌蛋白（CCL6）的变化，探讨血清CCL6在诊治AECOPD中的临床意义。方法随机选择我院呼吸内科住院及门诊COPD患者共61例，其中AECOPD患者31例、COPD患者30例，同时招募健康对照组34例。收集患者及对照组临床资料、血清标本、肺功能，采用ELISA法测定血清CCL6、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、超敏C反应蛋白（hsCRP）水平。结果 AECOPD组血清CCL6低于对照组（P＜0．05），而MMP-9、hsCRP水平显著高于对照组（P＜0．05）。AECOPD组血清中CCL6与MMP-9、hsCRP水平呈明显的负相关性（P＜0．05），血清中CCL6水平与肺功能下降呈正相关。结论CCL6可作为AECOPD的生物学标记志物和治疗靶点。

Clara细胞分泌蛋白；慢性阻塞性肺疾病；基质金属蛋白酶-9；超敏C反应蛋白

慢性阻塞性肺疾病（COPD）突出的特征是具有进行性发展的不完全可逆的气流受限，病因尚不十分明确，与有害气体及有害颗粒的异常炎症反应有关，致残率和病死率很高，全球40岁以上发病率已高达9%～10%。本研究通过检测AECOPD患者血清CCL6含量，进一步探讨CCL6在AECOPD发病机制中的作用，以及与该病严重程度的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集我院2012年1月—2016年12月住院及门诊COPD患者共61例，其中AECOPD患者31例、COPD患者30例，同时招募健康对照组34例。所有COPD患者诊断及病情分级均符合2015慢性阻塞性肺疾病全球倡议中诊断标准Ⅱ～Ⅳ级患者。所有AECOPD组患者还需符合：近期内咳嗽、咳痰及呼吸困难症状在基线水平上急性加重，需调整治疗方案。同时AECOPD组患者还需排除以下情况：（1）入院前2周内使用过抗生素，合并有肝胆疾病、风湿免疫性疾病以及其他系统感染以及胸部CT或X线显示有肺部实质性炎症。（2）长期或近期使用免疫抑制剂者，以及由结核、真菌、肿瘤等因素导致的慢性喘息者；（3）有精神疾患或不能配合治疗者；（4）研究前30 d内，有全身糖皮质激素和长期吸人糖皮质激素+长效β2受体激动剂史；（5）经辅助检查证实突发气胸或肺栓塞导致的症状加重者。3组患者一般资料对比，P＞0.05，差异无统计学意义。见表1。

1.2 研究方法

1.2.1 外周血采集和处理 三组患者采集空腹静脉血，AECOPD患者血清需在入院治疗前空腹采集。标本采集后，在室温下静置20 min，以离心半径8 cm、离心速度为3 000 r/min离心10 min后分离血清，血清标本置于-70℃冻存备用，待测CCL6及、MMP-9、hsCRP浓度。

1.2.2 CCL6、MMP-9、hsCRP的测定 均采用ELISA法检测血清中的CCL6及MMP-9、hsCRP的浓度，CCL6使用上海德波生物技术有限公司生产的人CCL6酶联免疫吸附测定试剂盒，MMP-9试剂盒由武汉博士德工程有限公司生产，hsCRP浓度测定采用比浊法，试剂盒购自北京东雅生物工程有限公司。均按试剂盒说明操作。

表1 三组患者一般资料对比

1.3 统计学方法

采用SPSS11.0对实验数据进行统计学处理，计量资料采用（±s）表示，多组间比较使用单因素方差分析，两两比较采用SNK法，计数资料用百分数表示，相关性分析使用Pearson检验法，P＜0.05，差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组研究对象FEV1%预计值等指标

3组患者第1秒用力呼吸容积占预测值百分比（FEV1%预计值）和第一秒用力呼气容积占用力肺活量百分比（FEVl/FVC）在对照组与COPD组、AECOPD组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 3组研究对象FEV1%等指标比较

2.2 CCL6、hsCRP、MMP-9在血液中的浓度变化

（1）CCL6浓度比较：对照组CCL6浓度高于COPD稳定组，COPD稳定组CCL6浓度高于AECOPD组，P＜0.05，差异有统计学意义；（2）MMP-9浓度比较：对照组MMP-9浓度低于COPD稳定组，COPD稳定组低于AECOPD组，P＜0.05，差异有统计学意义；（3）hsCRP浓度比较：对照组hsCRP浓度低于COPD稳定组，COPD稳定组hsCRP浓度低于AECOPD组，P＜0.05，差异有统计学意义。见下表3。

2.3 AECOPD患者血清中CCL6浓度与hsCRP、MMP-9及肺功能相关性分析

相关性研究发现，AECOPD患者血清中CCL6浓度与hsCRP、MMP-9均呈负相关，与肺功能下降呈正相关。见表4。

表3 血液中CCL6、hsCRP、MMP-9的浓度变化

表4 CCL6浓度与hsCRP、MMP-9及肺功能相关性分析

3 讨论

COPD是一种复杂性渐进性的疾病，具有慢性炎症、不可逆的气流受限和肺气肿等特点[1]，在发病过程中，气道、肺实质、及肺血管的慢性炎症是COPD的特征性改变，中性粒细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞等多种炎症细胞及组分均参与了COPD的发病过程[2]。有研究显示，CRP在炎症急性期明显升高,炎症恢复时下降，因此建议将其作为炎症发生、发展和疗效观察的重要指标[3]。MMP-9是降解细胞外基质的主要蛋白酶，作为一种炎症反应的生物学标记物，参与了COPD的炎症反应。Clara细胞主要是指覆盖于远端细支气管的非纤毛上皮细胞，其分泌的主要物质之一为CCL6。血液中的CCL6几乎均来源于肺组织，因此血液中的CCL6水平与肺组织的合成和分泌关系密切。在体外培养的支气管上皮细胞中过表达CCL6，可以抑制IL-1β刺激后IκB 的磷酸化，从而抑制核因子κB的激活，同时炎症因子IL-8表达也降低[4]；其还可直接抑制多种炎症介质的生成并降低其生物学活性[5]。

本研究结果显示，AECOPD患者外周血中MMP-9和hsCRP浓度明显高于正常对照组和COPD稳定组；随着COPD病情好转，由急性发作期转为缓解期后，MMP-9和hsCRP浓度明显降低，提示严重反应减轻。同时，外周血CCL6浓度水平具有相反的变化趋势，即AECOPD患者外周血CCL6浓度明显低于正常对照组和COPD缓解期患者，而随着COPD缓解，CCL6水平呈升高趋势。还发现，CCL6浓度与肺功能下降有相关性，与国外报道一致[6]。

小气道Clara细胞受损，CCL6分泌减少，抑制MMP-9等炎症因子的作用减弱，使得肺组织及血清中的MMP-9的含量升高，促进COPD的发病过程中炎症反应的形成。M Pang 等人[7]报道CCL6抑制MMP-9的表达通过NF-kb和p38MAPK信号转导通路。该通路可能在COPD的形成过程中发挥重要作用。目前国外也有研究证实血清中CCL6可能直接或间接地抑制了炎症因子的释放，而随着病情的逐渐加重，炎症因子的持续活化致使C1ara细胞的破坏以及CCL6分泌减少[5，8]。

CCL6参与COPD的具体机制[9]可能与如下有关：（1）吸烟：目前已知吸烟是COPD发生、发展的重要因素之一，长期香烟暴露可导致Clara细胞数目及CCL6分泌减少。戒烟后CCL6水平升高。（2）给予抗氧化剂乙酰半胱氨酸可阻止氧化应激对Clara细胞的损害，从而使CCL6的水平增加。同时乙酰半胱氨酸增加干扰素-γ浓度，后者增加CCL6 mRNA的转录及减少CCL6 mRNA的降解，从而CCL6的水平增加。

综上所述，在AECOPD形成过程中，血液中CCL6水平减少，且与肺功能下降相关。随着COPD缓解，CCL6水平呈升高趋势。这种改变与COPD的发生与发展有关，未来的研究将决定CCL6是否成为一个治疗靶点。

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Clinical Significance and Correlation of Serum CCL6 in Patients With Chronic Obstructive Pulmonary Disease

WAN Yunpeng Department of Respiratory Medicine, Linqing People's Hospital, Linqing Shandong 252600, China

Objective The changes of serum Clara cell secretory protein (CCL6) in patients with chronic obstructive pulmonary disease (COPD), acute exacerbation (AECOPD) and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) at stable stage were determined by COPD, to investigate the clinical significance of serum CCL6 in the diagnosis and treatment of AECOPD.Methods A total of 61 COPD patients in our department of respiratory medicine were randomly selected, 31 patients with AECOPD and 30 patients with COPD, and 34 healthy controls were recruited at the same time. Clinical data, serum samples and lung function of the patients and the control group were collected, serum CCL6, matrix metalloproteinase -9 (MMP-9) and hypersensitive C reactive protein (hsCRP) levels were measured by ELISA.ResultsThe serum CCL6 in group AECOPD was lower than that in control group (P＜0.05), while the levels of MMP-9 and hsCRP were signifcantly higher than that of control group (P＜0.05). Serum CCL6 levels were negatively correlated with the levels of MMP-9 and hsCRP in group AECOPD (P＜0.05), serum CCL6 levels were positively correlated with lung function decline.ConclusionCCL6 can be used as a biological marker, target and therapeutic target of AECOPD.

CCL6; COPD; MMP-9; hsCRP

R563

A

1674-9308（2017）16-0092-03

10．3969/j．issn．1674-9308．2017．16．048

山东省临清市人民医院呼吸内科，山东 临清 252600