李文婷，邹伟，曹琳，张平(南华大学附属南华医院，湖南衡阳421002)



miR-145靶向抑制MMP-9表达对大鼠脑动脉血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

李文婷，邹伟，曹琳，张平
(南华大学附属南华医院，湖南衡阳421002)

目的 观察miR-145对大鼠脑动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响，并探讨其作用机制。方法 利用组织贴块法分离大鼠脑基底动脉VSMC，将细胞分为3组，对照组转染空载体；miR-145组转染miR-145；miR-145+MMP-9组转染miR-145后再转染MMP-9。采用qPCR方法检测各组MMP-9 mRNA表达，Western blotting法检测MMP-9蛋白表达。向三组细胞中加入50 ng/mL TNF-α刺激细胞增殖，采用CCK8法检测细胞增殖情况，Transwell小室检测细胞迁移能力。根据TargetScan和miRanda数据库预测，野生型MMP-9的3′-UTR区域含有miR-145靶向结合片段，采用双荧光素酶报告基因检测验证miR-145和MMP-9的靶向关系。结果 miR-145组MMP-9 mRNA和蛋白表达均低于对照组(P均<0.05)，miR-145+MMP-9组MMP-9 mRNA和蛋白表达均高于miR-145组(P均<0.01)。加入TNF-α处理后，miR-145组的细胞增殖OD值低于对照组，miR-145+MMP-9组的细胞增殖OD值高于miR-145组(P均<0.01)；miR-145组细胞迁移数低于对照组，miR-145+MMP-9组细胞迁移数高于miR-145组(P均<0.01)。双荧光素酶报告检测结果显示，miR-145能够抑制野生型MMP-9的荧光素酶活性(P<0.01)，但不能抑制突变型MMP-9的荧光素酶活性。结论 miR-145能够通过下调MMP-9抑制TNF-α诱导的大鼠脑动脉VSMC增殖和迁移。

脑梗死；血管平滑肌细胞；微小RNA；miRNA-145；基质金属蛋白酶9；细胞增殖；细胞迁移

脑梗死的发病率、病死率和致残率均很高，严重影响人类的身体健康和生活质量[1]。在我国，超过30%的脑梗死是由颅内动脉粥样硬化性狭窄所致[2]。在动脉粥样硬化(AS)斑块形成的不同阶段，血管平滑肌细胞(VSMC)的结构和功能都发生异常改变[3]，其释放的基质金属蛋白酶(MMP)是AS斑块形成和破裂的重要因子[4]。MMP-9作为MMP家族成员，不仅可以充分降解Ⅳ型胶原-细胞基底膜成分，而且能够促进炎症反应和VSMC增殖、迁移，导致AS斑块不稳定，从而形成血栓[5]。因此，探讨MMP-9在AS中的调节机制，对预防AS的发生发展具有重要意义。微小RNA(miRNA)是由21～22个核苷酸组成的非编码小RNA片段，通过与靶蛋白mRNA的3′-UTR结合发挥负向调控作用，参与细胞增殖、凋亡和分化的过程[6, 7]。……