何思雨 成文玉 金红星

（河北工业大学化工学院，天津 300130）

S-丙二酰转移酶基因失活对地中海拟无枝酸菌产利福霉素的影响

何思雨 成文玉 金红星

（河北工业大学化工学院，天津 300130）

为提高利福霉素的产量，构建了S-丙二酰转移酶基因失活的地中海拟无枝酸菌。利用融合PCR构建S-丙二酰转移酶基因的同源重组载体，通过电击转化导入到地中海拟无枝酸菌中，使之发生同源重组，以安普霉素为标记，筛选了S-丙二酰转移酶基因失活菌株，并对比了突变菌株与原始菌株的利福霉素SV产量。成功构建了S-丙二酰转移酶基因的同源重组载体，获得了地中海拟无枝酸菌突变株A. mediterranei △fabD，失活菌株的利福霉素SV产量为168.08 mg/L，比原始菌提高了9.94%。S-丙二酰转移酶基因的失活，弱化了突变菌株脂肪酸的合成，强化了利福霉素的合成。

地中海拟无枝酸菌；利福霉素；S-丙二酰转移酶；融合PCR；基因失活

利福霉素是一类由地中海拟无枝酸菌（Amycolatopsis mediterranei）产生的重要安莎类抗生素，主要用于治疗肺结核和其他分枝菌酸感染引起的疾病，如麻风和艾滋病等［1-3］。利福霉素可以特异性地抑制依赖于DNA的RNA聚合酶的活性，使病原菌不能正常合成RNA产物，从而达到抑菌目的［4］。地中海拟无枝酸菌发酵得到的利福霉素是由利福霉素A、B、C、D、SV等多种组分构成的，其中利福霉素SV是利福平、利福喷丁等利福霉素类药物的直接合成前体［5-7］。

地中海拟无枝酸菌作为利福霉素的生产菌，长期以来主要以诱变育种为主，Pietro等［8］通过传统NTG诱变—筛选的方法得到了利福霉素B的高产菌株A. mediterranei HP-130，金玉坤等［9］利用UV诱变再经L-色氨酸、氯化铯等类似物作耐受处理，使利福霉素SV的产量提高10%左右。……