王玲玲夏苗苗董会娜朱蓓薇张大伟，

（1. 大连工业大学食品学院，大连 116034；2. 中国科学院天津工业生物技术研究所，天津 300308）

筛选脱氮假单胞菌启动子提高维生素B12产量

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（1. 大连工业大学食品学院，大连 116034；2. 中国科学院天津工业生物技术研究所，天津 300308）

维生素B12（VB12/钴胺素）具有多种生理学功能，广泛应用于制药、食品等行业。脱氮假单胞菌是维生素B12常用工业菌株之一。通过筛选高表达启动子来过表达VB12合成途径基因，能有效提高菌株的VB12生产能力。通过对脱氮假单胞菌中某些编码热激蛋白和分子伴侣基因前含启动子在内的非编码序列用启动子在线预测软件进行分析，选取PibpA、PcbpA、PdnaJ、PhtpG、Pdnak、PgrpE的非编码区与编码绿色荧光蛋白的GFP报告基因相连，通过酶标仪检测GFP的荧光信号值，对编码热激蛋白和分子伴侣基因前的非编码区所含有的启动子的表达强度进行评估，以获得高表达的启动子对VB12合成途径的基因进行过表达。结果表明，含有启动子Pdnak的非编码区，其表达的GFP荧光值最高。进而构建强启动子Pdnak与维生素B12合成途径基因cobA的过表达重组菌，发酵数据表明，与对照菌株相比重组菌株维生素B12产量提高21.5 mg/L。筛选高表达启动子用于维生素B12合成途径关键基因的表达，是一种有效的提高维生素B12产量的方法。

脱氮假单胞菌；强启动子；cobA；维生素B12；Gibson assembly

维生素B12（Vitamin B12）又称钻胺素［1］，作为一种含钴的类咕啉化合物［2］，是唯一需要肠道分泌物帮助才能被吸收的维生素。维……