杨海波， 王清俊， 李苏童， 陈小琳， 慕 婷

(1西安市中心医院肾脏内科， 陕西 西安 710003； 2铜川矿务局中心医院肾脏内科， 陕西 铜川 727000)

沉默微小RNA-218表达保护STZ诱导的糖尿病大鼠肾组织

杨海波△， 王清俊2， 李苏童1， 陈小琳1， 慕 婷1

(1西安市中心医院肾脏内科， 陕西 西安 710003；2铜川矿务局中心医院肾脏内科， 陕西 铜川 727000)

目的： 探讨沉默微小RNA-218(microRNA-218， miR-218)表达对链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠肾脏组织的保护作用及其可能机制。方法: 采用单次腹腔注射STZ (50 mg/kg)方法制备糖尿病大鼠模型并构建miR-218短发夹RNA(short hairpin RNA，shRNA)慢病毒载体。SD大鼠被随机分为健康对照组、糖尿病模型组、空载慢病毒组及miR-218-shRNA组。于自动生化仪上检测不同时点(4、8和12周)大鼠血糖、24 h尿蛋白量、血清肌酐(serum creatinine，SCr)及血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)含量。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肾脏组织miR-218的表达。RT-qPCR和Western blot检测血红素氧合酶1(heme oxygenase-1，HO-1)、肾病蛋白(nephrin)和p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK)的mRNA及蛋白表达水平。Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)法检测肾脏组织细胞凋亡。结果: 与健康对照组相比，STZ处理后大鼠miR-218表达水平显著升高。同时模型大鼠的血糖、24 h尿蛋白量、SCr及BUN含量显著升高(P<0.05)；模型大鼠肾脏组织中HO-1和nephrin的mRNA和蛋白表达水平显著降低，而p38 MAPK蛋白的磷酸化水平显著升高；另外，模型大鼠肾脏组织中的caspase-3活性也显著升高。模型大鼠感染miR-218-shRNA后，miR-218表达水平显著下降并可以显著逆转上述效应。miR-218-shRNA组肾脏组织细胞的凋亡水平显著低于糖尿病模型组及空载慢病毒组。结论: miR-218参与了糖尿病大鼠的肾脏损伤，慢病毒载体沉默其表达能有效抑制肾脏组织细胞的凋亡，提示miR-218可以作为糖尿病肾病的基因治疗靶点。

微小RNA-218； 慢病毒载体； 糖尿病； 肾脏

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病主要的微血管并发症，也是导致终末期肾病的主要原因[1]。微小RNA(microRNA， miRNA)是一类具有调控功能的非编码RNA分子，广泛参与生长发育、增殖及凋亡等生物学过程。已知有多种miRNA、分子及信号通路参与了DN的病理过程[2-4]。我们前期的体外研究发现[5]，microRNA-218(miR-218)在高糖培养的肾小球足细胞中过表达，并且通过调节血红素氧合酶1(heme oxygenase-1，HO-1)促进足细胞凋亡。……