凌 云， 屠 珏， 蔡兆伟， 蔡月琴， 褚燕青， 陈民利

(浙江中医药大学 1动物实验研究中心， 2比较医学研究所， 浙江 杭州 310053)

黄芩素诱导乳腺癌细胞自噬*

凌 云1, 2△， 屠 珏1, 2， 蔡兆伟1, 2， 蔡月琴1, 2， 褚燕青1， 陈民利1, 2

(浙江中医药大学1动物实验研究中心，2比较医学研究所， 浙江 杭州 310053)

目的： 考察黄芩素诱导乳腺癌细胞的自噬作用，并初步探讨其机制。方法: 采用MTT实验考察黄芩素对乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞活力的影响，确定给药剂量。Western blot检测黄芩素(25、50和100 μmol/L)及联合自噬抑制剂3-MA作用下，MCF-7细胞和4T1细胞中自噬特征蛋白LC3-II和LC3-I的表达水平，流式细胞术Annexin V/PI双染法观察3-MA对黄芩素诱导MCF-7细胞和4T1细胞凋亡的影响，确认黄芩素诱导自噬的作用。通过Western blot考察自噬信号通路相关蛋白p-mTOR、mTOR、p-AKT和AKT的蛋白水平，结合AKT-mTOR激活剂EGF明确AKT-mTOR通路在黄芩素诱导乳腺癌自噬中的作用。结果: 50 μmol/L及其以上剂量的黄芩素可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞的活力，其作用具有显著的时效和量效性。Western blot结果表明，50和100 μmol/L黄芩素作用下MCF-7细胞和4T1细胞的LC3-II/LC3-I比例显著增强，3-MA加入后又明显降低。流式细胞术结果显示，相比黄芩素单用组，联合自噬抑制剂可促进MCF-7细胞的坏死和凋亡。通路蛋白研究表明mTOR和AKT总量不变，其活化蛋白水平在黄芩素作用下显著降低，而加入EGF后又再次增加。结论: 黄芩素可通过抑制AKT-mTOR通路诱导乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞自噬。

黄芩素； 乳腺癌细胞； 自噬； AKT-mTOR信号通路

乳腺癌是一种在女性中发病率较高的癌症，2015年公布的中国肿瘤临床数据显示，其发生率占了所有女性肿瘤的15%，居于首位，且呈现逐年上升和年轻化的趋势[1]。……