吴洁丽，张爱慕，杜珂珂,徐 峰

(温州市中心医院妇产科，浙江 温州 325000)

HPV L1壳蛋白检测联合细胞学筛查宫颈变病的临床价值

吴洁丽，张爱慕，杜珂珂,徐 峰

(温州市中心医院妇产科，浙江 温州 325000)

目的 探讨HPV L1壳蛋白检测联合细胞学在宫颈病变筛查中的临床应用价值。方法 随机收集2014年11月至2016年11月期间温州市中心医院妇科收治的宫颈病变患者的宫颈脱落细胞学标本共420例，采用液基细胞学(TCT)检查宫颈细胞学改变，采用免疫细胞化学法检测HPV L1壳蛋白的表达情况，同时以宫颈活组织病理检查结果作为金标准进行对比研究。结果 420例检测标本中，单纯TCT结果阳性10例(2.38%)，单纯HPV L1壳蛋白表达阳性的15例(3.57%)；二者检测结果均为阳性的6例(1.43%)。对TCT或 HPV L1壳蛋白检测为阳性的患者及160例二者检测均为阴性的患者做宫颈活组织病理学检查，并以此检查结果作为标准得出：TCT检查的敏感度为38.89%(7/18)，特异度为97.95%(143/146)；HPV L1壳蛋白检测的敏感度为55.56%(10/18)，特异度为96.58%(141/146)；二者联合检测的敏感度为94.44%(17/18)，差异具有统计学意义(P<0.05)；特异度为94.52%(138/146)，差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 HPV L1壳蛋白检测联合细胞学能够兼备二者的优势，互补不足，在宫颈病变的临床筛查中具有较高的敏感度和特异度，能够提高宫颈病变诊断的准确率，值得临床推广与应用。

人乳头瘤病毒L1壳蛋白；宫颈病变；液基细胞学；免疫细胞化学法；宫颈活检

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，严重危害妇女的身体健康和生命安全。高危型人乳头瘤病毒(HPV)的持续感染是宫颈从癌前病变进展到宫颈癌的主要原因[1]，早期诊断、早期干预宫颈癌前病变对于降低宫颈癌的发生率和死亡率具有非常重要的意义。目前临床上主要使用宫颈液基细胞学检查(thinprep cytologic test，TCT)和HPV检测对宫颈病变进行筛查。作为新型宫颈细胞学病变检测技术的TCT较传统的巴氏涂片法具有更高质量的制作标本和异常细胞检出率，但是TCT检查的敏感度低、重复性差，检测结果受主观因素影响大。HPV L1壳蛋白是HPV病毒复制早期的一种结构蛋白，它在宫颈细胞中的表达水平能够精确地反映HPV病毒的感染状态[2]，可通过使用免疫细胞化学法检测宫颈细胞学标本完成，但是HPV L1检测的特异度较低[3]。近年来，应用TCT或HPV L1壳蛋白检测预测宫颈成为临床医生的研究热点，关于二者联合运用诊断宫颈病变的临床价值尚不肯定。本文拟以宫颈组织活检结果为金标准，联合HPV L1壳蛋白和TCT对宫颈细胞进行检测，探讨二者联合应用对于宫颈病变诊断的准确性及特异性，为临床宫颈癌筛查方法的改进提供参考依据，现具体报告如下。

1材料与方法

1.1一般资料

采用随机抽样法抽取2014年11月至2016年11月温州市中心医院妇科收治的420例宫颈病变患者作为研究对象，年龄范围20～71岁，平均年龄(40.2±9.4)岁。

入选标准：①HPV检测结果阳性；②非妊娠妇女；③无心、肝、肾等重要脏器系统疾病；④无神经性系统疾病；⑤患者或其家属自愿参与并签署知情同意书。排除标准：①有既往宫颈手术史；②宫颈肿瘤病史或其他恶性肿瘤病史。

1.2检查方法及诊断标准

常规收集患者宫颈口及颈管的脱落上皮细胞，采用TIB-Auto Prep 1800全自动液基薄层细胞制片机制作宫颈液基薄层细胞片2张，分别用于TCT(液基薄层细胞试剂盒，浙江易柏生物技术有限公司)检查和HPV L1壳蛋白检测，同时进行宫颈病理活组织检查。

1.2.1 TCT检查

TCT检查结果由我院两位资深病理科医师进行双盲阅片，并依据2001年TBS分类报告系统进行分级命名，TBS系统LSIL对应组织学中的CIN Ⅰ；HSIL 对应组织学中的CIN Ⅱ、CIN Ⅲ；SCC为宫颈癌。

1.2.2 HPV L1壳蛋白检测

采用美国Advanced公司生产的HPV L1蛋白染色试剂盒进行免疫细胞化学法检测HPV L1壳蛋白的表达。显微镜下阅片，HPV-L1壳蛋白为核蛋白质，细胞核呈红色染色为特异性阳性染色，如果出现≥1个被红染的细胞核即诊断为HPVL1壳蛋白阳性。

1.2.3宫颈活组织病理学检查

TCT或HPV L1壳蛋白任一检测结果为阳性的患者均接受宫颈组织病理学检查；TCT和HPV L1壳蛋白检测结果均为阴性的妇女则自愿决定是否接受宫颈活组织病理学检查。采用PHILIPS SLC-2000A/B型电子阴道镜数字成像系统，对外阴、阴道、子宫颈阴道进行全面检查，未发现可疑病变，诊断为正常宫颈；有可疑病变则取组织活检；组织经石蜡固定、切片、HE染色，在显微镜下观察，以病理诊断结果≥CIN Ⅰ确诊为阳性(+)。

1.3统计学方法

应用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析，计数资料以率来表示，组间比较用检验，相关性分析用Spearman相关检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 TCT检查与HPV L1壳蛋白检查结果比较

在420例受检妇女中，单纯TCT结果阳性的有10例，单纯HPV L1壳蛋白结果阳性的有15例，阳性率分别为2.38%和3.57%，其中TCT和HPV L1壳蛋白联合检测结果均为阳性的有6例(1.43%)，其余401例二种检测方法均为阴性。

2.2 TCT、HPV L1壳蛋白与宫颈组织病理学检查结果的比较

在420例受检妇女中，有40.24%的患者(169例)接受宫颈活组织检查，共有17例为阳性(10.06%)，见表3。10例TCT结果阳性的患者中有7例活检结果阳性(表1)；15例HPV L1壳蛋白结果阳性的患者中有10例活检结果为阳性(表2)；401例TCT和HPV L1壳蛋白检测结果均为阴性的妇女中有144例自愿接受宫颈活组织病理学检查，结果仅有1例宫颈活检结果为阳性，占0.69%，见表1。

表1 TCT与宫颈活组织病理学检查结果的比较[n (%)]

值得注意的是在15例HPV L1壳蛋白阳性表达的患者中，宫颈活检结果显示宫颈组织正常为5例，CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CINⅢ、SCC分别为5例、3例、1例、1例，可以看出随着宫颈癌前病变分级程度的加重，HPV L1壳蛋白的阳性检测率逐渐降低，见表2、表3。

表2 HPV L1壳蛋白与宫颈活组织病理学检查结果的比较[n (%)]

2.3 TCT、HPV L1壳蛋白检测及二者联合检测的敏感度和特异度比较

单纯TCT检测的敏感性为38.89%，单纯HPV L1检测的敏感性为55.56%，二者联合检测的敏感性为94.44%，显著高于单一方法检测的敏感性；三种检测方式的特异度比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

表3 HPV L1壳蛋白联合TCT检测与宫颈活组织病理学检查结果的比较[n (%)]

Table 3 Comparison of results between TCT combined HPV L1 capsid protein and cervical biopsy[n (%)]

表4 敏感度和特异度比较[% (n/N)]

Table 4 Comparison of sensitivity and specificity[% (n/N)]

检查方法敏感度特异度TCT38.89(7/18)*97.95(143/146)HPVL155.56(10/18)*96.58(141/146)TCT和HPVL194.44(17/18)94.52(138/146)χ212.5472.465P0.0020.292

注：*表示与TCT、HPV L1检测相比较，P<0.05。

3讨论

3.1 用TCT进行宫颈细胞学检查的可靠性分析

宫颈癌的病死率居妇科肿瘤首位，近年来随着环境恶化加重、工作及生活压力增大等原因，导致宫颈癌的发病率呈逐年上升的趋势，且倾向于年轻化，因此加强宫颈癌前病变的早期诊断、及时治疗对于预防宫颈癌的发生，降低宫颈癌的死亡率具有重要的意义[4-5]。细胞学诊断是宫颈癌筛查的有效手段，组织病理学检查是诊断宫颈癌的金标准[6]。TCT作为近年来宫颈细胞学检查的新技术，比传统的巴氏涂片技术能尽可能多的保留所取细胞样本，减少血液、宫颈液及大量炎性细胞对制片质量的干扰，同时薄层涂片的使用使细胞更加分散，得到的图片更加清晰，利于辨认不正常的上皮细胞等，大大的提高了标本的质量及对宫颈癌的检出率。我们的研究结果显示TCT在妇女健康人群中检测宫颈病变的敏感性为38.89%，特异性为97.95%，可以看出虽然TCT诊断宫颈病变的特异性高，但是宫颈癌的筛查中仍存在着主观因素不足、敏感度低等缺点[7]，需结合其他检测方式才能提高对宫颈癌的敏感性。

3.2 HPV L1壳蛋白可以作为预测宫颈病变转归的一种标志物

研究表明，宫颈癌的发生与发展与HPV的持续感染有密切的关系[8]。L1壳蛋白是HPV的主要衣壳蛋白，在感染任一亚型的HPV病毒时都可以表达，其表达与HPV病毒的复制和早期感染密切相关。HPV感染早期多为低度病变，病毒处于活跃复制状态；而在感染后期多进展为高度病变，HPV病毒基因发生整合的可能性较大，L1壳蛋白表达缺失[9]。有研究认为，在不同分级的宫颈病变中，HPV L1壳蛋白的阳性率从CINⅠ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、SCC依次降低[10]，因此HPV L1壳蛋白的表达水平能够也宫颈癌的预后和宫颈变病提供消息，从而指导临床治疗。本研究16例HPVL1阳性表达的标本，随着宫颈癌前病变分级程度的加重，HPV L1壳蛋白的阳性检测率逐渐降低，这与前述报道结论基本一致，也提示HPV L1壳蛋白可以作为预测宫颈病变转归的一种标志物。

3.3 HPV L1壳蛋白与TCT联合检测用于预测宫颈病变的意义

目前HPV L1壳蛋白检测方法为定性测定，其敏感度及特异度有待进一步提高，若联合细胞学、P16等可能提高其预测宫颈病变的准确性，但与哪种检测方法连用才能在诊断宫颈病变的有效性、准确性及经济性方面达到最佳尚需临床进一步的验证。HPV L1壳蛋白是免疫反应攻击HPV病毒和病毒感染细胞的主要靶位，具有高度保守性，是主要的特异性抗原[11]，研究认为HPV-DNA检测联合TCT筛查，能够显著提高宫颈病变及早期宫颈癌的诊断率和准确性，降低漏诊率和过度诊断率。但也有研究认为HPV L1壳蛋白随着宫颈病变程度增高呈低表达水平，与TCT联合使用较单独TCT检测对于预测≥CIN Ⅱ的宫颈病变具有更高的敏感度和阴性预测值[12]。本研究结果显示单独TCT检查对宫颈癌前病变筛查的敏感度为38.89%，而与HPV L1壳蛋白检测联合后的敏感度提高到94.44%，再次证明TCT联合HPV L1壳蛋白检测方法的敏感度高于单一方法的检测(P<0.05)，但二者联合检测的特异度为94.52%，与单纯采用TCT或HPV L1相比较，差异无统计学意义，该结论需要扩大受检样本数进一步验证。

综上所述，在宫颈病变的临床筛查工作中应用HPV L1壳蛋白检测联合细胞学检查能够相互协同、互补不足，提高筛查的敏感度及宫颈病变诊断的准确率，具有较高的临床推广与应用价值。

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[专业责任编辑:薛 艳]

Clinical value of HPV L1 capsid protein detection combined with cytology in screening of cervical lesions

WU Jie-li, ZHANG Ai-mu, DU Ke-ke, XU Feng

(Department of Gynecology and Obstetrics, Wenzhou Central Hospital, Zhejiang Wenzhou 325000, China)

Objective To investigate the clinical value of HPV L1 capsid protein detection combined with cytology in the screening of cervical lesions. Methods Totally 420 cervical exfoliative cytology specimens were collected from November 2014 to November 2016 in Wenzhou Central Hospital. Cytology and expression of HPV L1 capsid protein in these specimens were detected by liquid based cytology test (TCT) and immunocytochemistry, respectively. Furthermore,these results were compared with cervical biopsy which was considered as golden standard. Results In these 420 cases, 10 cases (2.38%) were positive for TCT alone, 15 cases (3.57%) were positive in HPV L1 capsid protein detection alone. Among them, 6 cases (1.43%) were both positive in TCT and HPV L1 capsid protein. Cervical biopsy was performed in patients with positive TCT or HPV L1 capsid protein and 160 patients with both negative detection, and result of biopsy was taken as standard. The sensitivity of TCT was 38.89% (7/18) and the specificity was 97.95% (143/146). The sensitivity of HPV L1 protein was 55.56% (10/18) and the specificity was 96.58% (141/146). The sensitivity of combined detection of two methods was 94.44% (17/18), which showed significant difference (P<0.05), while the specificity was 94.52% (138/146), which was not statistically different (P>0.05).Conclusion In the clinical screening of cervical lesions, HPV L1 capsid protein combined with TCT, which showing higher sensitivity and specificity can combine the advantages of these two methods, and complement the insufficiency of each other. They can improve the diagnosis accuracy of cervical lesions, which is worthy of clinical application.

human papilloma virus L1 capsid protein; cervical lesions; cytology test; immunocytochemistry; cervical biopsy

2017-02-18

吴洁丽(1981)，女，主治医师，硕士，主要从事产前诊断工作。

徐 峰，主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.06.026

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1673-5293(2017)06-0694-03