郑锦畅 康银辉 魏波 祝兆波 王朝军 林颢 李广盛 郭伟雄 荆凯鹏 孙欣 彭智恒

广东医科大学附属医院骨科中心，广东 湛江 524001

糖皮质激素(Glucocorticoids, GCs)被广泛用来治疗过敏性、自身免疫性和炎症性疾病，但长时间应用会不同程度的引起骨量丢失，甚至会发生骨坏死[1,2]。这可能与激素抑制成骨细胞的分化、增殖，促进成骨细胞、骨细胞的凋亡等相关[3]。有研究发现激素作用后的股骨头内骨细胞胞质中有大量的脂质沉积[4,8]。是何种原因导致该现象发生，目前尚无明确解释，为阐明这一现象本文拟用皮质酮以不同浓度、时间作用于成骨细胞，观察细胞中脂质沉积现象及脂质合成相关基因与下游酶的表达特点，从而分析可能机制的所在。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1实验动物：新生24 h内SD胎鼠，购于广西医科大学动物实验中心。

1.1.2主要药物及试剂：皮质酮(日本梯希爱)；反转录试剂盒，SYBR®Green qPCR荧光染料(大连宝生物公司)；SDS(Sigma公司)；Tweenn20(BIOSHARP公司)；蛋白Marker(Thermo Science)；SREBP1一抗兔抗鼠，SREBP2一抗兔抗鼠，HMGCR一抗兔抗鼠，FAS一抗兔抗鼠(SANTA CRUZ公司)；HRP标记的驴抗山羊二抗，蛋白酶抑制剂(上海碧云天公司)；蛋白酶裂解液(上海贝博公司)；化学发光试剂盒(天根公司)；HRP标记的山羊抗兔二抗(北京中杉金桥公司)； Nile Red(上海源叶科技公司)；茜素红S(上海华东试剂公司)。

1.1.3主要仪器设备：LightCycler480荧光定量PCR仪[罗氏(上海)有限公司]；激光共聚焦显微镜[罗氏(上海)有限公司]；CO2培养箱(Thermo赛默飞世尔科技公司)；OLYMPUS光学倒置显微镜(日本OLYMPUS公司)；SDS-PAGE凝胶电泳仪(BIO-RAD)。

1.2 实验方法

1.2.1皮质酮溶液配制：将34.6 mg皮质酮粉剂……