杨 娟 苗春辉 宋文菲 胡宗文 罗卫庭 王艳辉 张学文

（云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所，蒙自 661101）

中蜂蜂王人工授精效果分析

杨 娟 苗春辉 宋文菲 胡宗文 罗卫庭 王艳辉 张学文

（云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所，蒙自 661101）

中蜂蜂王人工授精是中蜂育种工作的重要部分。为了更好地进行中蜂的育种工作，本文就中蜂蜂王人工授精工作的相关因素进行了研究与探讨。研究结果表明，蜂王的授精日龄、授精后蜂王的置放方法、放王的过程与时间及后期管理是中蜂蜂王人工授精成功的关键。

中蜂；人工授精；蜂王；授精效果

蜜蜂人工授精是近40年发展起来的一门新技术，为蜜蜂育种和蜜蜂遗传研究提供了可靠、有效的实验手段。人工授精（instrumental insemination）也称器械授精，即通过器械装置把1只或多只雄蜂的精液注射入蜂王输卵管内使其受精[1]。

该项技术真正发展于1926~1947年，美国科学家R.L.沃森被世界公认为现代蜜蜂人工授精技术的创始人。而中国开展这项技术的研究始于1959年，20世纪80年代后，开始在中蜂上进行试验，目前已达到国际先进水平，利用该技术取得了单雄授精、单雄多雌授精和自体授精的新突破，在育种及保种工作中占有重要的地位。

蜜蜂人工授精技术在西方蜜蜂育种工作应用比较广泛，在中蜂育种方面应用较少，起步较晚。1983年广州昆虫所研究指出中蜂蜂王所需精液远高于西蜂，对成熟雄蜂需求量大，并且即使人工受精后蜂王也会再次婚飞。

1984年姜妧姣指出通过小核群的组织、管理可以提高蜂王授精及诱入成功率[2]。1985年福建农学院研究表明参与授精的雄蜂约为10~14日龄，蜂王为5~7日龄最佳，授精量为6 μl[3]。

与西方蜜蜂蜂王人工授精相比，中蜂蜂王人工授精的难度较大，精液采集、授精后对蜂王的管理等都有一定难度，易导致授精失败

本文就中蜂蜂王人工授精工作成功的主要因素进行研究与探讨，为更好地进行中蜂的育种工作提供前期基础。

1 材料与方法

1.1 材料

试验蜂种为中华蜜蜂（Apis cerana cerana）；试验蜂群共4群，每群初始群势为0.5~1.5脾成蜂。

1.2 试验时间与地点

2015年4月21日中蜂处女王出房，4月27日进行人工授精，5月1日先后将蜂王介绍入无王群中；地点为云南省红河州蒙自市草坝镇云南省农科院蚕蜂所内的中蜂试验蜂场。

1.3 试验器材

20ml一次性注射器2支，100 μl采精器（改装过的进样器）2支，500 ml 75%医用酒精1瓶，长方形毛巾3条，自制捕雄蜂笼4~5个，灭菌培养皿1个，医用酒精棉1包，灭菌镊子1把，250 ml生理盐水1~2瓶，医用氧气瓶1个（内部充满二氧化碳），针式王笼4个。

1.4 试验方法与步骤

首先，对试验操作间及人工授精仪进行15 min的紫外灭菌消毒，灭菌的同时，捕捉巢脾边缘及蜂箱边缘的雄蜂（这些雄蜂接近性成熟，易于采集精液）；放置15 min后进入操作间，用75%医用酒精浸湿毛巾，将仪器和操作台擦拭干净，用75%医用酒精清洗所有器材；将生理盐水与抗生素以30%的比例配比混匀，用混匀液清洗采精器4~5遍，然后注入整管的混匀液，管内不允许留有气泡，将采精器摆放在仪器上。

开始采集精液，先将采精器吸入一小段空气（即两个空格，4 μl），取雄蜂，用大拇指、食指揉捏胸部进行刺激，另一食指从后面向前推，取成熟雄蜂的精液，不能吸到粘液，精液与混匀液间留有一点空隙，不能混合在一起[4]，中蜂性成熟雄蜂精液颜色较西蜂的略深些，且量少，与粘液紧密粘合在一起，取时要格外小心。待精液采集完，用75%医用酒精擦拭背腹钩，将仪器摆正调节好，将蜂王放入麻醉室内，用背腹钩将其蜇针腔拉开，找到阴道口，用探针辅助着将装有精液的注射管伸入进去，注射5 μl左右，然后将蜂王翅膀剪掉三分之一并放回扣王笼里。

第二天，将第一天人工授精的蜂王进行二次麻醉，每只持续40 s左右。

1.5 授精后的管理

第二次麻醉后，将蜂王放入准备好的装有隔王栅的无王群内，用针式王笼将蜂王扣于巢蜜较集中的位置，待工蜂不围王并接受后放出，定期对蜂群进行查看，确保无新王台出现及不发生围王现象。

2 结果与分析

2.1 蜂王存活情况

试验的4只蜂王，在第二次麻醉后，在蜂场内进行扣王时，1只苏醒并飞逃，不明原因死亡1只，剩下2只蜂王，存活率为50%。

2.2 蜂王产卵情况

表1 中蜂蜂王人工授精后产卵情况

2.3 蜂王存活时间

从2015年5月1日，将王放出，并产卵封盖，到6月30日因群势发展及其他因素，将王换掉。授精后蜂王存活了两个月。

3 讨论

动物的性行为是对一系列刺激做出具有种属特性的反应，这种反应是通过前完成行为、主行为、后完成行为而动态表现出来的。这种顺序出现的行为组分是自发的，是动物生存所必需的[1]。

蜜蜂人工授精是一种非自然交配行为，蜂王自然也就没有达到完成自然交配所需的承前启后的一系列行为要求。这种蜂王在生理状态方面会存在一些与自然交尾蜂王不同的反应，因此，授精后的蜂王及蜂群管理就至关重要，尤其是中蜂。

本文在西蜂蜂王人工授精的基础上进行的中蜂蜂王人工授精实验，蜂王存活率及产卵情况与之前研究的西蜂相近[4]。研究结果显示，适宜的蜂王授精日龄、授精后的蜂王关放方式及时间是中蜂蜂王人工授精成功的关键因素。

本文实验结果为今后中蜂人工授精工作提供了一些参考经验，中蜂蜂王人工授精的成功取决于以下四点：

一是蜂王授精的日龄。中蜂蜂王授精的日龄相对于西蜂要小一些，一般为5~6日龄为最佳[3]；

二是授精后蜂王的置放方法。用针式扣王笼将蜂王扣于蜜脾上，有利于扣王笼内工蜂饲喂蜂王；

三是放王过程及时间，中蜂蜂王要在第二次麻醉后，马上用针式王笼扣于蜜脾上，于3日后放出；

四是每隔3日查看1次蜂群，在外界蜜粉源不足时，还要进行补助饲喂。同时，针对围王情况要反复诱王，直至不围上。总之，抓住以上几点，基本可以保证中蜂蜂王人工授精的成功，保证中蜂育种工作顺利开展。

非自然交配的蜂王仍有交尾冲动，如果管理不善，既会影响授精效果，又会出现授精王丢失或过早被替代的现象，必须十分重视授精后至开始产卵这段时间的管理。

有两点细节还需研究与探讨，即蜂王剪翅与否、剪翅的长短对中蜂蜂王人工授精工作的影响程度。本文中飞逃的蜂王就是由于翅膀留的稍长而跑掉，同时，在相对密闭的空间进行放王操作是必要的。

[1]陈国宏,王丽华.蜜蜂遗传育种学[M].北京:中国农业出版社, 2010.

[2]姜妧姣.人工授精蜂王的饲养管理技术[J].中国蜂业，1984,(2):14.

[3]福建农学院养蜂系研究室.中华蜜蜂人工授精技术研究的进展[J].中国蜂业,1985,（1）:8～9.

[4]宋文菲,杨娟,余玉生,等.蜂螨防治对西方蜜蜂人工授精蜂群的影响[J].中国蜂业,2016,（1）:36～37.

国家蜂产业技术体系专项资助CARS-45-SYZ17)；云南省科技厅“云南蜂王浆高产蜂种应用示范项目”（2015BB010）

杨 娟(1989-)，女，研究实习员，主要从事蜜蜂生物学研究。

张学文(1965-)，男，副研究员，主要从事蜜蜂资源、饲养及授粉研究。