胡涛++杨帆++杨秀荣

摘要 利用双偏振极化干涉（Dual polarization interferometry，DPI）测量技术实时研究了三磷酸腺苷（AP）与其适配体（APbinding aptamer， ABA）间的相互作用。将单链ABA固定在DPI氮化硅芯片上，采用DPI技术实时监测AP与固定的ABA的相互作用过程中敏感层的质量、厚度、密度的变化。通过详细分析敏感层质量变化，得到AP与ABA间的结合速率常数 （ka=466 × 103 L/（mol·s）、解离速率常数（kd =170 × 10 ymbolm@@ 2·s ymbolm@@ 1）、结合常数 （KA=27 × 105 L/mol）和解离常数（KD =37 × 10 ymbolm@@ 6 mol/L）。通过测定敏感层质量、厚度和密度随AP浓度的变化，分别建立了测定AP的方法，检出限（LOD， 3σ）分别为022 μmol/L（质量变化）、014 μmol/L（厚度变化）、032 μmol/L（密度变化）。本研究利用DPI技術揭示了ABA与AP相互作用中结构变化的实时信息，构建了新型AP传感器，用于实际血清样品中AP的检测，结果令人满意。

关键词 双偏振极化干涉； 核酸适配体； 三磷酸腺苷； 相互作用

1引 言

核酸适配体是通过指数富集配体系统进化（ELEX）技术，从随机单链寡聚核苷酸文库中筛选出的DNA或RNA寡聚核苷酸＼[1＼]。核酸适配体对相关配体具有高特异性和高亲和性，与抗体相比，适配体具有免疫原性低、靶分子范围广、价格低廉、可快速体外合成以及容易修饰等优点。因此，基于核酸适配体构建的生物传感器在蛋白质研究＼[2＼]、药物检测＼[3＼]、临床诊断＼[4＼]等方面得到了广泛应用。研究核酸适配体与靶分子间的相互作用过程，对于研究其相互作用机理，构建适配体传感器，具有重要的参考意义。高效液相色谱＼[5＼]、原子力显微镜＼[6＼]、电泳＼[7＼]、聚合酶链反应＼[8＼]、等温滴定量热法和荧光光谱技术＼[9，10＼]都被用来研究适配体和靶分子间的相互作用过程。……