吴军 孙刚 董朝 马斌林

·论著·

BRIP1基因多态性在维族、汉族妇女早发性乳腺癌的分布状况分析

吴军 孙刚 董朝 马斌林

目的 观察新疆维吾尔族、汉族妇女早发性乳腺癌BRCA1相互作用蛋白1(BRIP1)基因外显子突变情况。方法 直接测序法检测新疆维吾尔族与汉族妇女早发性乳腺癌(年龄30～40岁，各80例)BRIP1基因外显子区域。结果 (1)维族：rs4986765的基因型分布在孕激素受体阳性、阴性间比较差异有统计学意义(P<0.05)。rs4986764、rs4986763与Ki-67有一定相关性(均为)，其突变型携带者可分别增加乳腺癌中Ki-67≥15%型发病风险(OR=9.000)。rs4986764、rs4986763在有、无恶性肿瘤家族史组间比较，差异有统计学意义(均为P<0.01)。rs4986764、rs4986763基因型分布在初潮年龄<14岁、≥14岁组间比较，差异有统计学意义(均为P<0.05)，初潮年龄≥14岁的乳腺癌突变型携带率高于初潮年龄<14岁。(2)汉族：BRIP1基因rs4986765、rs4986764、rs4986763位点基因型分布与所研究的临床病理特征均无统计学意义(P>0.05)。结论 在新疆维吾尔族早发性乳腺癌中，BRIP1基因多态性与初潮年龄、恶性肿瘤家族史、孕激素受体、Ki-67有相关性；但汉族早发性乳腺癌无相关性。

早发性乳腺癌； 维吾尔族； BRIP1基因； 单核苷酸多态性

基因在人类多种肿瘤中有着重要的作用[1]，对肿瘤的生长、转移起着负性调节的作用[2]。据估计，5%～10%乳腺癌由显著遗传倾向引起[3]，一些家族风险由高外显率易感基因引起，特别是BRCA1和BRCA2[4]，但是这两个基因突变占所有乳腺癌患者的比例<5%，占家族性癌症的比例不到25%[5]。有研究表明，在没有BRCA突变的家庭发生乳腺癌可能由低外显率等位基因引起[6]。BRCA1相互作用蛋白1(BRIP1)，是一种DNA解旋酶，它影响DNA修复能力和BRCA1的抑癌功能，基于其与BRCA1基因的相互作用，该BRIP1基因被认为是一个潜在的乳腺癌易感基因[7-9]。我们展开了针对新疆维吾尔族、汉族妇女早发性乳腺癌(年龄30～40岁)BRIP1基因检测，研究其携带及分布特点，为进一步筛选乳腺癌高危人群提供相关的理论依据。

对象与方法

一、对象

我院年龄30～40岁的维族女性早发性乳腺癌患者80例(初治)，术前未接受放疗、化疗，并排除其他恶性肿瘤，按照年龄匹配，同期收集我院住院治疗的汉族女性乳腺癌80例(初治)，均无亲缘关系，术后均经病理切片证实。收集恶性肿瘤家族史、月经初潮史、病理报告等详细临床信息。入组患者均签署BRIP1基因检测知情同意书，经医院伦理委员会批准。

二、方法

1.DNA提取：采集受检者空腹外周静脉血5 ml，EDTA抗凝，-80℃低温冰箱保存备用。用血液基因组DNA提取系统(非离心柱型)，按照试剂盒说明书从5 ml外周血中提取基因组DNA。

2.设计引物及PCR反应：共设计了26对引物扩增了26个片段，覆盖了该基因20个编码外显子和启动子2 kb。引物用在线Primer 3软件设计，由上海天昊生物科技有限公司遗传分析中心合成，建立PCR反应体系。

3.DNA测序：PCR产物经虾碱酶和外切酶I纯化后用ABI公司的BigDye3.1试剂盒测序，在ABI3130上样，测序文件用Polyphred软件分析。

三、统计学分析

应用SPSS 16.0软件对数据进行分析，用χ2检验进行Hardy-Weinberg遗传平衡定律吻合度检验；BRIP1基因多态性与临床、病理的相关性采用χ2检验，计算P值、相对危险度(odd ratio，OR)和95%可信区间(confidenceinterval，CI)。双侧检验P<0.05为差异有统计学意义。

表1 维、汉族BRIP1基因外显子位点发生突变结果及功能预测

注：Polyphen预测分值>0.9表示：很可能影响蛋白质功能，SIFT预测分值<0.05表示：影响蛋白质功能。S：同义突变；M：错义突变，F：移码突变。CEU为欧洲人群，CHB为中国北方汉族人群，MAF：最小等位基因频率。

表2 维族早发性乳腺癌与BRIP1基因外显子区高频多态位点相关性分析

注：aFisher的精确概率值，括号内为%。针对检测出的高频率位点与乳腺癌进行相关性分析

表3 汉族早发性乳腺癌与BRIP1基因外显子区高频多态位点相关性分析

注：aFisher的精确概率值，括号内为%。针对检测出的高频率位点与乳腺癌进行相关性分析

结 果

1.BRIP1基因突变检测：(1)用直接测序法对BRIP1基因外显子区域进行突变检测，共检测出9个突变位点(表1)，包括5个错义突变、2个同义突变和2个缺失突变，分别位于EXON6、EXON9 、EXON19和EXON20。其中，维族人群中检测到4个位点突变，汉族有9个位点突变。(2)Polyphen和SIFT软件预测蛋白质功能(表1)：维、汉早发性乳腺癌患者共有的突变位点rs4986764、汉族突变位点c.2593C>T均为有害突变，可能影响BRIP1蛋白质的功能。

2.BRIP1基因多态性与病理特征的相关性：(1)维吾尔族乳腺癌见表2。 在孕激素受体(PR)分层分析中，发现rs4986765位点野生型、显性模型(突变型携带者)在PR阴性与PR阳性组间分布存在差异(P<0.05)。在Ki-67分层分析中，rs4986764、rs4986763与维族早发性乳腺癌Ki-67有一定相关性，其野生型TT、显性模型(TC+CC)分布在Ki-67<15%、≥15%组间存在差异(均为P<0.01)，其突变型携带者可分别增加维族乳腺癌患者中Ki-67≥15%型发病风险9倍(OR=9.000，95%CI：2.151～37.659)。(2)汉族乳腺癌见表3。BRIP1基因rs4986765、rs4986764、rs4986763位点基因型分布与PR、Ki-67均无统计学意义(P>0.05)。

3.BRIP1基因多态性与临床特征的相关性：(1)维吾尔族乳腺癌见表2。①在恶性肿瘤家族史分层分析中，rs4986764、rs4986763与维族早发性乳腺癌家族史有一定相关性，其野生型TT、显性模型(TC+CC)分布在有、无恶性肿瘤家族史组间存在差异(均为P<0.01)。②rs4986764、rs4986763基因型分布在维族乳腺癌初潮年龄<14岁、≥14岁分组中的差异具有统计学意义(均为P<0.05)，初潮年龄≥14岁的乳腺癌患者突变型携带率高于初潮年龄<14岁的乳腺癌。(2)汉族乳腺癌见表3。BRIP1基因rs4986765、rs4986764、rs4986763位点基因型分布与恶性肿瘤家族史、初潮年龄均无统计学意义(均为P>0.05)。

讨 论

BRIPl/BACHl基因跨度180 kb，包括20个外显子，编码1249个氨基酸的蛋白质，它被定位于染色体17q22上，而BRCA1位于17q21上[10]。BRIP1基因突变已被证明与乳腺癌的风险相关[11]，但是存在种族和地域的差异性。

本实验共检测出9个突变位点，其中2个缺失突变分别为MUTATION(c.2990_2993del，EXON20)、MUTATION(c.2992_2995del，EXON20)，缺失突变造成氨基酸读码框顺序的改变，并产生新的终止密码子，使蛋白发生截短，造成功能缺失。De Nicolo等[12]对BRCA1/BRCA2突变阴性的乳腺癌进行BRIP1基因突变检测，在BRIP1外显子20中亦发现4个核苷酸的缺失(c.2992～2995 delAAGA)，进一步研究表明BRIP1缺失突变(2992-2995delAAGA)的重组蛋白具有降低蛋白质的稳定性和减少与BRCA1相互作用的能力。本试验对BRIP1外显子20上的c.2992_2995del缺失突变患者进行临床分析，发现此患者患病年龄较早(39岁)，且有恶性肿瘤家族史。

增殖细胞核抗原ki67蛋白可作为乳腺癌化疗的敏感性指标，它充分的反应了肿瘤细胞的增殖状态，ki67蛋白表达下降越明显，化疗效果也就越肯定[13]。本次试验发现rs4986764、rs4986763位点的突变型携带者可分别增加维族乳腺癌患者中Ki-67≥15%型发病风险9倍，说明这两个位点的显性模型可能对乳腺癌Ki-67高表达产生促进作用，这种有害作用增加了肿瘤侵袭力，因此，上述两个位点可能对预测乳腺癌的预后有一定的指导意义。

维族与汉族乳腺癌比较，平均发病年龄早，激素受体状况也存在差异[14]。本研究发现，rs4986763、rs4986764(Ser919Pro)位点的野生型TT、显性模型(TC+CC)分布在维族早发性乳腺癌家族史、初潮年龄组间均存在差异，rs4986765位点野生型、显性模型在PR阴性与PR阳性组间分布存在差异，说明rs4986765位点可能与PR阳性乳腺癌的关系更为密切，由于样本量不够大，分层分析后无法对rs4986765位点与PR的相对危险度进一步分析。

上述结果表明，BRIP1基因多态性位点与新疆维吾尔族早发性乳腺癌中PR、Ki-67、乳腺癌家族史、初潮年龄有相关性，而且rs4986764位点的蛋白功能预测与关联分析结果一致均为有害突变，可能对进一步临床研究有指导意义。

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(本文编辑：杨泽平)

Distribution analysis of BRIP1 gene polymorphism between Uygur and Han nationality women with earlyonset breast cancer

WUJun，SUNGang，DONGChao，etal.

(DepartmentofBreastandHead-NeckSurgicalOntology，AffiliatedCancerHospitalofXinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011，China)

Objective To observe gene exon mutation of BRCA1 interacting protein 1(BRIP1) in Xinjiang Uygur and Han nationality women with early onset breast cancer.Method Exon region of BRIP1 gene were detected via direct sequencing in Xinjiang Uygur and Han nationality women with early onset breast cancer(age：30～40 years old，separately 80 cases).Results (1)In Uighur：There was a significant difference of the frequencies between the genotype of rs4986765 among the PR(-)and PR(+)(P<0.05);There was a certain correlation between the mutation sites(rs4986764 and rs4986763)and the Ki-67(P<0.01)，and the mutants could increase the breast cancer patients，risk of Ki-67≥15% subtype(OR=9.000);There were differences in rs4986764 and rs4986763 genotypes among Family history of cancer and non-cancer(P<0.01).There were differences in rs4986764 and rs4986763 genotypes among menarche age<14 and ≥14(P<0.05)，The mutant carrying rate in Menarche age at≥14 of breast cancer patients was higher than the menarche age at<14 years of breast cancer patients.(2)In Han nationality，There were not statistically significant BRIP1 gene in rs4986765，rs4986764 and rs4986763 locus genotypes with clinicopathological characteristics studied(P>0.05).Conclusion Among early-onset breast cancer in Xinjiang women of Uygur nationality，there was a certain correlation between BRIP1 gene polymorphism and menarche age、Family history of cancer、PR and Ki-67，There may instructive to further clinical studies，But there was no correlation between the early-onset breast cancer of Han nationality.

early onset breast cancer； Uighur； BRIP1 gene； single nucleotide polymorphism(SNP)

10.3969/j.issn.1005-6483.2017.04.014

新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目(2016D01C348)

830011 乌鲁木齐，新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺头颈外科/新疆肿瘤防治研究所

马斌林，Email：mbldoctor@126.com

2016-11-25)