冯沛然 黄建芳 王敏珍 廖伟聪 郝代玲 向军俭

(暨南大学抗体工程研究中心，广东省分子免疫与抗体工程重点实验室，广州510632)

抗人PD-L1单克隆抗体的制备及其应用①

冯沛然 黄建芳 王敏珍②廖伟聪 郝代玲 向军俭

(暨南大学抗体工程研究中心，广东省分子免疫与抗体工程重点实验室，广州510632)

目的：获得能应用于临床诊断以及阻断PD-L1与PD-1结合的抗人PD-L1单克隆抗体。方法：采用重组表达的人PD-L1蛋白免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤细胞融合技术获得稳定分泌抗人PD-L1单抗的阳性细胞株，ELISA方法鉴定抗体的特异性、亲和力、亚型等方面特性；免疫印迹、间接免疫荧光方法对肿瘤细胞进行检测；肿瘤杀伤实验验证抗体阻断活性。结果：共获得2株抗人PD-L1单抗，抗体效价分别为1∶2.56×106和1∶3×105，亲和力分别为1.5×109L/mol和2.5×108L/mol，均与PD-L2蛋白无交叉反应。免疫印迹、间接免疫荧光证实抗体有诊断作用。杀伤实验显示抗体有阻断作用。结论：共获得两株稳定分泌高效价、高特异性的抗人PD-L1单抗的杂交瘤细胞株，能作为诊断抗体应用于肿瘤表型检测和预后有效性的评估。抗体的阻断功能可应用于联合CIK细胞免疫治疗。

PD-L1；单克隆抗体；流式细胞术；CIK细胞；肿瘤诊断

程序性细胞死亡配体(Programmed cell death ligand-1，PD-L1)也称B7-H1、CD274，主要表达于活化的T细胞、B 细胞、巨噬细胞、树突状细胞表面。PD-L1与表达于活化T细胞表面的PD-1结合后可向T细胞传递抑制信号，抑制T细胞的功能。在肿瘤抗机体免疫中，肿瘤组织异常高表达PD-L1，通过与PD-1结合抑制CTL对其的杀伤，PD-1/PD-L1通路与免疫细胞的抗肿瘤免疫应答息息相关。……