张 妮 左 丽 王 克 袁 静

(贵州医科大学免疫学教研室,贵阳550025)

·基础免疫学·

DENV-2感染的HUVECs与CD4+T细胞相互作用对炎性细胞因子产生的影响①

张 妮 左 丽 王 克 袁 静

(贵州医科大学免疫学教研室,贵阳550025)

目的：研究原代人脐静脉内皮细胞(Primary human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)被登革Ⅱ型病毒(DENV-2)感染，与CD4+T细胞共培养后，对产生主要炎性细胞因子的相互影响。方法：密度梯度离心法提取浓缩白细胞中的PBMC，免疫磁珠法阴性分选CD4+T细胞，流式检测细胞表面CD3,CD4分子的表达和CD4+T细胞的纯度。HUVECs经S1P1特异性受体激动剂CYM-5442预处理24 h，加入103TCID50的DENV-2感染后，与CD4+T细胞共培养，Real-time RT-PCR动态检测DENV-2感染HUVECs后病毒NS1基因及IL-6、IL-8的mRNA和CD4+T细胞内IL-4、IL-17、TNF-α、IFN-γ的mRNA相对表达量；双抗体夹心ELISA法检测培养上清IL-6、IL-8的表达。结果：流式检测经免疫磁珠阴选的CD4+T 细胞纯度为(98.02±0.32)%。DENV-2感染HUVECs后病毒NS1基因相对表达逐渐增加，在24 h(3.03±0.26，P<0.001)达到峰值后下降，而感染DENV-2后与CD4+T细胞共培养组的NS1基因相对表达量低于感染组，且呈下降趋势。感染后IL-6和IL-8表达均有上调，与CD4+T 细胞共培养后，IL-6和IL-8在各时间点表达均明显升高(P<0.01)。CYM-5442预处理的共培养感染组中，IL-6在24 h(28.91±2.34，P<0.05)、 36 h(19.36±0.1，P<0.05)和72 h(13.84±0.82，P<0.05)显著下降，IL-8表达显著下降。与感染后的HUVECs共培养后CD4+T细胞的IL-4、IL-17、TNF-α、IFN-γ的mRNA表达均明显升高。结论：DENV-2能感染原代HUVECs；与CD4+T细胞共培养后NS1的表达被抑制。CD4+T细胞不仅能增强被DENV-2感染的HUVECs的活化，同时也能被感染后的HUVECs活化。

登革病毒；人脐静脉内皮细胞；CD4+T细胞；细胞因子；免疫调节

登革病毒(Dengue virus,DENV)是单股正链RNA病毒，属于黄病毒科黄病毒属，有四种血清型[1]，可引起蚊媒传播性疾病。在过去五十年里，全球的发病率增加了30倍，每年有5千万至1亿例登革病毒感染发生，对全球大多数人的健康造成了严重的威胁[2]。我国的流行地区主要为东南沿海和台湾，近年来发病率明显上升[3,4]。登革病毒感染后大部分患者表现为自限性的登革热(Dengue fever,DF)，少数患者发展成为严重的登革出血热(Dengue hemorrhagic fever,DHF)和登革休克综合征(Dengue shock syndrome,DSS)，主要的临床表现有严重的血浆渗漏，血小板减少，出血甚至休克等[5]。这些症状的发生与血管内皮细胞的功能障碍和病理损伤有一定的关系[6]。……