王晓军，茹甫毅，吴双有，朱卫民，田培军

COX-2、VEGF及TGF-β1在慢性粒细胞白血病中的表达及临床意义

王晓军，茹甫毅，吴双有，朱卫民，田培军

目的 观察慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML)患者血清环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)的水平变化，探讨各指标在临床中的指导意义。方法 选取我院2014年1月—2015年8月确诊的CML 50例(白血病组)，予甲磺酸伊马替尼治疗3个月；同时选择在我院体检健康的40例(对照组)。比较两组血清COX-2、VEGF及TGF-β1的水平变化，并观察白血病组治疗前后血清COX-2、VEGF及TGF-β1的变化。结果 与对照组比较，白血病组治疗前后血清COX-2及VEGF水平显著升高，TGF-β1水平显著降低，差异有统计学意义(P<0.01)；与治疗前比较，白血病组治疗后血清COX-2、VEGF水平显著降低，TGF-β1水平显著升高，差异有统计学意义(P<0.01)。白血病组治疗前急变期、加速期血清VEGF及COX-2水平均较慢性期显著升高，TGF-β1水平则降低，差异有统计学意义(P<0.01)；治疗后完全缓解(CR)者血清COX-2、VEGF及TGF-β1水平逐渐恢复正常，与未缓解(NR)者比较差异有统计学意义(P<0.01)。白血病组血清COX-2、VEGF水平与TGF-β1水平呈负相关(R=-0.632，P<0.01；R=-0.315，P=0.026)。结论 COX-2、VEGF及TGF-β1与CML患者病情密切相关，可作为CML病情评估的重要参考依据。

粒细胞白血病，慢性；环氧合酶-2；血管内皮生长因子；转化生长因子-β1

慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML)是造血干细胞异常转化而产生的髓系恶性克隆性疾病，约占成人白血病的20%[1]。在肿瘤形成过程中，异常的血管生成发挥关键作用，且肿瘤细胞具有诱导血管生成的潜能，其在生长因子的刺激下转化为发挥作用的表型。血管内皮生长因子(VEGF)是一种特异性作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，能促进血管生成。环氧合酶-2(COX-2)可促进实体肿瘤的发生、发展，其在白血病患者中表达增加。转化生长因子β1(TGF-β1)是目前已知的作用最强的造血负性调控因子，不仅能刺激成纤维细胞的生长，修复创伤，还能调节造血功能，抑制肿瘤细胞的增殖。本研究观察CML患者血清COX-2、VEGF及TGF-β1的水平变化及其相关性，分析各指标的临床意义，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选取我院2014年1月—2015年8月确诊的CML 50例(白血病组)，其中男26例，女24例；中位年龄36岁；处于慢性期30例，加速期、急变期各10例，均符合《血液病的诊断及疗效标准》[2]制定的CML诊断标准，经外周血、骨髓和Ph染色体检查确诊，且bcr/abl融合基因或Ph染色体显示基因阳性，心、肝、肾等脏器功能均无明显异常。选择同期在我院体检健康的40例(对照组)，其中男20例，女20例；中位年龄38岁，均无血液系统异常，无肿瘤、感染性及自身免疫性疾病，无心、肝、肾等脏器损伤，近1个月无药物使用史。

1.2 治疗方法 白血病组均服用甲磺酸伊马替尼400～800 mg/d,治疗3个月。开始服药的1个月内每周检查血常规1次，以后每个月检查血常规1次，同时查肝肾功能、心肌酶等生化指标。患者每个月来院复诊时均行常规体格检查，每3个月做一次骨髓形态学及融合基因检测，每位患者至少回访3个月，直到观察终止或死亡。

1.3 检测方法 白血病组分别于治疗前后抽取空腹静脉血2 ml，对照组随机抽取空腹静脉血2 ml，均分离血清冻存待测。COX-2、VEGF及TGF-β1检测均按照酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒(购自美国Adlitteranl Diagnostic Laboratories)的操作说明进行。

2 结果

2.1 两组血清COX-2、VEGF及TGF-β1的水平变化 与对照组比较，白血病组治疗前后血清COX-2及VEGF水平显著升高，TGF-β1水平显著降低，差异有统计学意义(P<0.01);与治疗前比较，白血病组治疗后血清COX-2及VEGF水平显著降低，TGF-β1水平显著升高，差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。

表1 慢性粒细胞白血病组与健康对照组血清COX-2、VEGF及TGF-β1的水平变化

注：与对照组比较，bP<0.01；与治疗前比较，dP<0.01；COX-2为环氧合酶-2，VEGF为血管内皮生长因子，TGF-β1为转化生长因子β1

2.2 白血病组治疗前不同病变期血清COX-2、VEGF及TGF-β1水平比较 与慢性期比较，加速期和急变期血清COX-2及VEGF水平明显升高，TGF-β1水平明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)；与加速期比较，急变期血清COX-2、VEGF及TGF-β1水平差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 慢性粒细胞白血病组治疗前不同病变期血清COX-2、VEGF及TGF-β1水平比较

注：与慢性期比较，bP<0.01；COX-2为环氧合酶-2，VEGF为血管内皮生长因子，TGF-β1为转化生长因子β1

2.3 白血病组治疗后血清COX-2、VEGF及TGF-β1的水平变化 白血病组治疗后达完全缓解(CR)者(包括完全血液学缓解、完全遗传学缓解及完全分子学缓解)血清COX-2、VEGF及TGF-β1水平逐渐恢复正常，与治疗后未缓解(NR)者(包括部分缓解、血液学复发和耐药)比较差异有统计学意义(P<0.01)，见表3。

表3 慢性粒细胞白血病组治疗后完全缓解与未缓解血清COX-2、VEGF及TGF-β1水平比较

注：COX-2为环氧合酶-2，VEGF为血管内皮生长因子，TGF-β1为转化生长因子β1

2.4 白血病组血清COX-2、VEGF及TGF-β1的相关性分析 白血病组血清COX-2、VEGF与TGF-β1呈负相关(R=-0.632，P<0.01；R=-0.315，P=0.026),见图1、2。

图1 白血病组血清环氧合酶-2与转化生长因子β1的相关性分析

图2 白血病组血管内皮生长因子与转化生长因子β1的相关性分析

3 讨论

CML患者原始及幼稚细胞的恶性增生、积聚，逐渐取代和抑制正常骨髓造血功能，引发贫血、出血、感染及多组织器官浸润等症状，同时新生的异常血管增多，使骨髓微小血管密度明显高于正常人，且在肿瘤的生长、浸润和转移过程中发挥重要作用，与肿瘤的生长、扩散、转移及预后密切相关。VEGF作为一种特异性作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，可促进血管内皮细胞的增生，进而促进血管生成[3]。近年研究发现，新生血管亦参与白血病的病理、生理过程[4]。Bellamy等[5]研究发现，在急性白血病、CML和慢性淋巴细胞白血病患者的骨髓和外周血中均可发现VEGF及其受体的表达。

本研究表明，白血病组血清VEGF水平明显高于对照组，且治疗前加速期和急变期的表达亦明显高于慢性期，差异均有统计学意义；予甲磺酸伊马替尼治疗后达CR者，血清VEGF水平基本恢复正常，而NR者VEGF表达增加，分析甲磺酸伊马替尼可抑制CML患者细胞分泌VEGF，从而阻断新生血管形成，与Legros等[6]报道结果一致。

近年研究显示，COX-2在多种肿瘤组织中过度表达，参与肿瘤的发生、发展，作用机制可能与COX-2抑制细胞凋亡有关[7]。有研究证实COX-2可促进VEGF、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等血管新生因子的表达，直接刺激内皮细胞迁移，产生花生四烯酸，诱导血管生成和Bcl-2的表达，从而抑制内皮细胞的凋亡，提示COX-2抑制细胞凋亡的机制可能与Bcl-2的调节性表达有关[8]。Sappayatosok等[9]研究发现，COX-2在CML组的表达率和积分均高于正常对照组，提示COX-2与CML的发病有关。

本研究显示，白血病组血清COX-2水平明显升高，且治疗前加速期和急变期的水平亦明显高于慢性期，差异有统计学意义；治疗后NR者血清COX-2水平升高。推断COX-2与CML发病有关，随着病情进展，血清COX-2水平逐渐升高，提示COX-2可作为判断CML预后和临床分期的一个重要指标。

CML是造血系统的恶性肿瘤，其白血病干细胞多表达Ph+染色体及Bcr/Abl融合基因，而造血微环境中的骨髓间充质干细胞是调控造血功能的主要成分之一，通过与造血细胞直接接触和表达多种细胞因子以调节造血细胞的增殖和分化。TGF-β1作为最强的血细胞抑制因子之一，在维持造血干细胞持续处于静息状态、抑制过度增殖、诱导分化及促进细胞凋亡方面起重要作用[10]。

本研究显示，白血病组血清TGF-β1水平明显低于对照组，且治疗前加速期和急变期的水平亦明显低于慢性期，差异均有统计学意义；予甲磺酸伊马替尼治疗后，达CR者血清TGF-β1水平基本恢复正常，而NR者TGF-β1表达明显减低。说明CML患者血清TGF-β1水平越低，其对造血负调控的作用越弱，从而加速白血病细胞的大量增殖。

相关性分析显示，白血病组血清COX-2、VEGF与TGF-β1呈负相关，提示TGF-β1作为造血负性调控因子，抑制COX-2及VEGF的表达，表明血清COX-2、VEGF及TGF-β1水平与白血病细胞的表达和病情演变密切相关。

综上，随着CML的病情演变，血清COX-2、VEGF与TGF-β1的表达亦发生改变，动态监测血清COX-2、VEGF与TGF-β1的水平变化可作为判断患者病情及指导临床用药的参考依据。

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Expression and Clinical Significance of Serum Cyclooxygenase-2, Vascular Endothelial Growth Factor and Transforming Growth Factor-β1 in Chronic Myelogenous Leukemia

WANG Xiao-jun, RU Fu-yi, WU Shuang-you, ZHU Wei-min, TIAN Pei-jun
(Department of Hematology， Central Hospital of Ankang City， Ankang, Shaanxi 725000, China)

Objective To observe changes of serum cyclooxygenase-2 (COX-2), vascular endothelial growth factor (VEGF) and transforming growth factor-β1 (TGF-β1) levels in patients with chronic myelogenous leukemia (CML) and to discuss guidance significance of indexes. Methods A total of 50 patients with CML confirmed during January 2014 and Augest 2015 (leukemia group) were treated with Imatinib Mesylate for 3 months, and other 40 healthy people taking medical examination were selected as control group. Changes of serum COX-2, VEGF and TGF-β1 levels were compared in two groups, and changes of the levels before and after treatment in leukemia group were observed. Results Compared with those in control group， before and after treatment, serum COX-2 and VEGF levels were significantly increased, while TGF-β1 level was significantly decreases in leukemia group (P<0.01); compared with those before treatment, in leukemia group, serum COX-2 and VEGF levels were significantly decreased; while TGF-β1 level was significantly increased after treatment (P<0.01). In leukemia group, before treatment serum VEGF and COX-2 levels were significantly increased, while TGF-β1 levels were significantly decreased in acute transformation phase and accelerated-phase compared with those in chronic-phase (P<0.01); after treatment, COX-2, VEGF and TGF-β1 levels of complete remission (CR) patients returned to normal, and the differences in the levels compared with those in non-remission (NR) patients were statistically significant (P<0.01). Serum COX-2 and VEGF levels were negatively correlated with TGF-β1 level in leukemia group (R=-0.632，P<0.01；R=-0.315，P=0.026). Conclusion COX-2, VEGF and TGF-β1 levels are closely related to conditions of patients with CML, and therefore they can be used as important revidence of disease for evaluating CML condition.

Granulocytic leukemia, chronic; Cyclooxygenase-2; Vascular endothelial growth factor; Transforming growth factor beta 1

陕西省卫生科研项目(D80)

725000 陕西 安康，安康市中心医院血液内科

R733.72

A

1002-3429(2017)06-0099-04

10.3969/j.issn.1002-3429.2017.06.035

2017-02-27 修回时间：2017-03-30)