戴希希文萍

（1江西省抚州市食品药品检验所 抚州 344000；2江西省中医药研究院 南昌 330046）

HPLC法同时测定养胃颗粒中芍药苷和甘草苷的含量

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（1江西省抚州市食品药品检验所 抚州 344000；2江西省中医药研究院 南昌 330046）

目的：建立同时测定养胃颗粒中芍药苷和甘草苷含量的HPLC法。方法：色谱柱为Dikma Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸（15∶85），流速为1.0 ml/min，检测波长为230 nm，柱温30℃，进样量10 μl。结果：芍药苷在浓度29.85～298.5 μg/ml呈良好的线性关系，r=0.999 9；甘草苷在浓度5.28～132 μg/ml呈良好的线性关系，r=0.999 9；平均回收率分别为100.65%和101.31%。结论：该方法精密度好，结果准确、可靠、灵敏，可用于养胃颗粒中芍药苷和甘草苷的含量测定。

养胃颗粒；高效液相色谱法；芍药苷；甘草苷

养胃颗粒主要含山药、乌梅、白芍、甘草、炙黄芪等8味中药，该药有养胃健脾，理气和中之功效[1]，其质量标准收载于《中华人民共和国药典》2015年版一部中。该药中白芍具有平肝止痛，养血调经，敛阴止汗等作用，甘草则能益气、调和诸药，白芍与甘草是中医临床上常用的药对，现代药学研究证明，甘草与白芍有协同作用，解痉作用合用比两者单用显著增强。本次实验参考“一测多评”[2～3]和中国药典2015年版中的标准建立了白芍和甘草含量测定方法，对养胃颗粒中芍药苷和甘草苷的含量测定方法进行了实验研究[4～5]，建立了同时测定芍药苷和甘草苷的含量测定方法。现报告如下：

1 仪器与试剂

1.1 仪器HP-1100高效液相色谱仪（德国，包括HP化学工作站、G1311A四元梯度泵、1322A在线脱气机和G1315A二极管阵列检测器），CQ-250超声波清洗器（购于上海船舶电子设备研究所），AG-135电子天平（购于梅特勒-托利多公司），SimplicityTM个人型超纯水系统（购于Millipore公司）。

1.2 试剂芍药苷对照品（批号：110736-201540，购于中国食品药品鉴定研究院），甘草苷对照品（批号：111610-201507，购于中国食品药品鉴定研究院）；养胃颗粒（国药准字Z33020174）。

2 方法

2.1 色谱条件色谱柱为迪马Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸（15∶85）；流速1.0 ml/min；检测波长230 nm；柱温30℃。

2.2 对照品溶液的制备取芍药苷对照品约20 mg、甘草苷对照品约10 mg，精密称定，分别置于两个100 ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取10 ml两种溶液分别置于50 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用孔径0.45 μm的微孔滤膜过滤，即得。

2.3 样品溶液的制备取养胃颗粒10袋，研细，取0.40 g细粉，精密称定，置25 ml容量瓶中，加甲醇10 ml，超声处理30 min，放冷至室温，再加甲醇至刻度，摇匀，滤过，续滤液用孔径0.45 μm的微孔滤膜过滤，即得。

2.4 阴性试验按照药典标准规定的养胃颗粒处方，取除白芍和甘草外的其余药材，依药典中的制备方法制成阴性对照样品，并按“2.3”项下方法制备成阴性对照溶液。吸取芍药苷对照品溶液、甘草苷对照品溶液、样品溶液和阴性对照溶液各10 μl注入高效液相色谱仪，结果显示，阴性对照溶液色谱图中无芍药苷峰与甘草苷峰，说明在本方法色谱条件下，其余药材的化学成分对本测定无干扰。见图1～图4。

图1 芍药苷对照品色谱图

图2 甘草苷对照品色谱图

图3 阴性对照色谱图

图4 样品色谱图

2.5 线性关系考察

2.5.1 对照品溶液的制备精密称取甘草苷对照品6.60 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1 ml含甘草苷0.264 mg的对照品溶液。分别精密吸取该对照品溶液适量，加甲醇稀释成以下浓度：132 μg/ml、52.8 μg/ml、26.4 μg /ml、13.2 μg/ml、10.56 μg/ml和5.28 μg/ml。分别精密吸取10 μl，注入高效液相色谱仪中，按上述色谱条件测定对照品溶液的峰面积，将样品浓度与峰面积进行回归处理，回归方程为：Y=15 046.27X-1.295，r=0.9999（n=6），说明甘草苷对照品在5.28～132μg/ml范围内，对照品溶液的浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.5.2 精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品14.92 mg，置25 ml量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1 ml含芍药苷0.0597 mg的对照品溶液。分别精密吸取适量，加50%甲醇稀释成以下浓度：29.85 μg/ml、59.7 μg/ml、89.55 μg/ml、119.4 μg/ml、179.1 μg/ml和298.5 μg/ml。分别精密吸取10 μl，注入高效液相色谱仪中，按上述色谱条件测定对照品溶液的峰面积，将样品浓度与峰面积进行回归处理，回归方程为：Y=13.181 8X+0.252，r=0.999 9（n=6），说明芍药苷对照品在29.85～298.5 μg/ml范围内，对照品溶液的浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验取上述芍药苷和甘草苷对照品溶液各1份，精密吸取10 μl，连续进样6次，按“2.1”项下色谱条件分别测定芍药苷和甘草苷的峰面积，经计算，相对标准偏差（RSD）分别为1.46%和1.83%，符合药典要求，说明精密度良好。

2.7 稳定性试验取上述芍药苷和甘草苷对照品溶液各1份，每隔2 h进样1次，进样6次，测定峰面积，结果12 h内样品溶液中芍药苷和甘草苷的峰面积值基本一致，RSD分别为1.09%和1.32%，符合药典要求，说明样品溶液在12 h内是稳定的。

2.8 重复性试验取样品，研细，取约0.40 g，共6份，精密称定，置25 ml量瓶中，照“2.3”项下的方法制成样品溶液，按“2.2”项下色谱条件测定，结果RSD分别为1.98%和2.11%。

2.9 回收率试验取已知芍药苷、甘草苷含量的供试品约0.20 g，共6份，精密称定，置25 ml量瓶中，分别精密加入甘草苷（0.302 4 mg/ml）和芍药苷（1.498 mg/ml）对照品溶液各1 ml，加甲醇至近刻度，超声处理30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，按2.1项下方法操作，并计算回收率。见表1～表2。

表1 芍药苷回收率测定结果

表2 甘草苷回收率测定结果

2.10 样品的含量测定取5份不同批号的样品，按2.3项下方法操作。见表3。

表3 养胃颗粒中芍药苷、甘草苷含量（mg/g）

3 讨论

在本次试验中，我们还考察了不同提取时间对样品提取效果的影响，我们取样品4份，分别超声处理15 min、30 min、45 min和60 min，结果显示，超声处理60 min、45 min与30 min无明显差异，提取效果均优于超声处理15 min，为节约时间，简化操作，故选用超声处理30 min。

也考察了不同提取溶剂对样品提取效果的影响，我们分别选择16%乙腈、70%乙醇和甲醇作为提取溶剂进行了比较，结果显示，甲醇提取液中芍药苷和甘草苷含量较高，故采用甲醇作为提取溶剂。最后，还考察了不同提取溶剂用量对样品提取效果的影响，选择精密加入甲醇25 ml、50 ml和75 ml对样品进行提取，结果显示，提取效果无明显差异，为方便操作、节省溶剂，选用了25 ml进行提取。

甘草与白芍是我国中医中的常用的药对，现代研究显示，白芍与甘草的有协同作用，两者联合用药解痉作用比各自单用效果显著增强。中国药典2010及2015年版所收载的白芍和甘草药材的标准中均分别建立了含量测定方法。本次实验对养胃颗粒中的芍药苷和甘草苷的含量测定方法进行了方法学研究，建立的含量测定方法可作为养胃颗粒质量控制的依据。

[1]国家药典委员编.中国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2015.1286

[2]丰加涛,金郁,王金成,等.基于定量指纹图谱技术的中药质量控制[J].色谱,2008,26(2):180-185

[3]王智民,高慧敏,付雪涛.“一测多评”法中药质量评价模式方法学研究[J].中国中药杂志,2006,31(23):1925-1930

[4]王跃生,饶毅,魏惠珍,等.HPLC-“内标”多控法测定四逆散中芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、甘草酸和新橙皮苷[J].中草药,2008,39(9): 1316-1319

[5]戴金明,林徐剑,施晓萍.高效液相色谱法同时测定养胃颗粒中3种成分的含量[J].浙江中医杂志,2016,54(9):696-697

R927.2

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10.13638/j.issn.1671-4040.2017.03.101

2017-03-30）

#通讯作者：文萍，E-mail：14834129@qq.com