高 翔 ， 崔少凡 ， 杨晨晨 ， 沙金丹 ， 林思彤 ， 赵敬翠 ， 张德显 ， 刘明春

(1.沈阳农业大学畜牧兽医学院 ， 辽宁沈阳110866 ； 2.辽宁省朝阳市建平县畜产品安全监察所 ， 辽宁朝阳122400)

奶牛隐性乳房炎葡萄球菌分离株药敏试验

高 翔1， 崔少凡1， 杨晨晨1， 沙金丹1， 林思彤1， 赵敬翠2， 张德显1， 刘明春1

(1.沈阳农业大学畜牧兽医学院 ， 辽宁沈阳110866 ； 2.辽宁省朝阳市建平县畜产品安全监察所 ， 辽宁朝阳122400)

为了解辽宁部分地区奶牛隐性乳房炎葡萄球菌的耐药性，采用生化鉴定试验对采集的奶牛隐性乳房炎阳性乳样进行了葡萄球菌的鉴定，采用肉汤微量稀释法测定葡萄球菌分离株对22种抗菌药物的敏感性。结果显示，31株奶牛隐性乳房炎葡萄球菌分离株对22种抗菌药物均产生了不同程度的耐药性，对氨苄西林、苯唑西林、青霉素、头孢氨苄、头孢唑林、林可霉素及磺胺甲噁唑耐药率为100%，对喹诺酮类药物敏感。100%葡萄球菌分离株同时耐5类以上(含5类)抗菌药物，以耐7类抗菌药物为主，占38.7%，其余依次为5耐、6耐及8耐，比率分别为35.5%、19.4%和6.5%。

葡萄球菌 ； 耐药性 ； 隐性乳房炎 ； 奶牛

奶牛乳房炎是威胁奶牛养殖业的棘手问题，根据临床表现分为临床型和隐性型两种[1]，我国将乳汁中体细胞数量高于50万/mL判定为隐性乳房炎[2]。隐性乳房炎具有发病率高、无明显临床症状、乳头及乳汁无明显的病理变化、病因复杂、难以诊治和防治困难的特点，对奶业生产的影响大大超过了临床型的乳房炎。葡萄球菌是引起奶牛隐性乳房炎的主要病原菌[3-5]，有关奶牛乳房炎葡萄球菌分离株耐药性的报道越来越多[6-8]，给奶牛乳房炎的防治带来较大困难，严重威胁着人类的健康。本试验对采自辽宁沈阳、阜新、锦州三市患隐性乳房炎奶牛的乳样进行葡萄球菌的分离鉴定，并对分离株进行耐药性测定，分析其耐药情况，以了解辽宁地区奶牛隐性乳房炎的耐药现状，对该地区奶牛隐性乳房炎的防治及耐药性监控具有指导意义。

1 材料与方法

1.1 材料 营养肉汤(NB)、MH培养基、高盐甘露醇培养基，购自北京奥博星生物技术有限公司；葡萄球菌属生化鉴定管，购自杭州天和微生物试剂有限公司；药敏试验药物标准品和金黄色葡萄球菌ATCC29213，购自中国兽医药品监察所。

1.2 方法

1.2.1 乳样采集 牛乳房常规挤奶消毒，弃前3把奶，取样，置于灭菌离心管中，标记、封口，于4 ℃保温箱中保存，尽快送至实验室。乳样采集自辽宁沈阳、阜新、锦州三市的规模化奶牛养殖场临床表现正常的泌乳期奶牛。

1.2.2 葡萄球菌的分离鉴定 采用体细胞计数仪按常规方法测定乳样中的体细胞数，根据SCC结果，将隐性乳房炎阳性乳样涂抹于高盐甘露醇培养基上，37 ℃培养24 h。根据菌落形态做初步判断并将分离的病原菌接种于葡萄球菌属生化常规鉴定管中，过夜培养，对照说明书判定细菌类型。

1.2.3 药敏试验 采用微量肉汤稀释法测定22种抗菌药物对31株葡萄球菌分离株的MIC，以金黄色葡萄球菌ATCC29213作为质控菌。测定方法及判断标准参考2013年美国临床实验室标准化研究所的标准[9]。

2 结果与分析

2.1 辽宁地区奶牛隐性乳房炎葡萄球菌鉴定结果 共采集乳样257份，其中阳性乳样104份，共鉴定出31株葡萄球菌。

2.2 辽宁地区奶牛隐性乳房炎葡萄球菌药敏试验结果与分析 22种抗菌药物对31株奶牛隐性乳房炎葡萄球菌分离株的药敏试验结果见表1。葡萄球菌分离株对氨苄西林、苯唑西林、青霉素、头孢氨苄、头孢唑林、林可霉素及磺胺甲噁唑耐药率为100%，而对喹诺酮类药物较敏感。葡萄球菌分离株最少耐13种药物，最多同时耐19种药物；其中11株菌株对18种抗菌药物耐药，占35.5%。耐16～18种抗菌药物的菌株数占总菌株数的80.6%(见图1)。

2.3 葡萄球菌分离株耐药谱分析 试验选取的22种抗菌药物分属9类：四环素类5种，青霉素类4种，喹诺酮类3种，头孢菌素类3种，酰胺醇类2种，磺胺类2种，氨基糖苷类、大环內酯类、林可胺类各1种。试验结果表明，同类药物之间存在不同程度的交叉耐药现象，因此从每一类药物中选取1种药物作为代表来分析多药耐药情况。31株葡萄球菌分离株共形成18种耐药谱(见表2)，耐7类药物的比率最高，达38.7%；其中以tpclhms耐药谱菌株数最高，达19.4%。

表1 22种抗菌药物对31株奶牛隐性乳房炎葡萄球菌的MIC测定结果

图1 葡萄球菌对22种抗菌药物多重耐药情况

表2 31株奶牛隐性乳房炎葡萄球菌s对9类抗菌药物的耐药谱

p：青霉素类； c：头孢菌素类； a：氨基糖苷类； m：大环內酯类； t：四环素类； l：林可胺类； h：酰胺醇类； q：喹诺酮类； s：磺胺类

3 讨论

随着临床上抗菌药物频繁及大规模使用，导致越来越多的菌株产生耐药性。有报道显示，从四川攀西地区奶牛场分离的葡萄球菌对青霉素、阿莫西林产生了耐药性[10]，新疆石河子地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌对氟苯尼考高度敏感达100%[11]，而河南某牛场分离的金黄色葡萄球菌对青霉素类药物耐药情况严重，而对喹诺酮类抗生素较为敏感[12]。本试验结果显示，分离自辽宁部分地区的奶牛隐性乳房炎葡萄球菌对磺胺类、青霉素类、头孢菌素类和林可霉素的耐药情况严重，但对氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星敏感。由此可见，从不同地区分离的葡萄球菌对抗菌药物的耐药性可能存在相似性，也可能存在差异，这可能与各地区之间的用药习惯及是否合理使用抗菌药物有关。根据本试验结果，建议被调查的牛场选用恩诺沙星等喹诺酮类药物治疗奶牛隐性乳房炎，并做到科学合理用药。

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2016-09-27

辽宁省科学技术厅农村科技特派行动、农民技术员培训项目(2013030055-201)

高翔(1993-)，女，硕士生，主要从事兽医药理与毒理学研究，E-mail：1437909960@qq.com

刘明春，E-mail：liumingchun@sina.com

S823

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0529-6005(2017)05-0095-03