魏 薇 ， 莫孔源 ， 刘 娟 , 陈 晓

(西南大学荣昌校区兽医科学工程研究中心中药创新研究室 ， 重庆荣昌402460)

翁苋颗粒对鸡白痢IL-2和IFN-γ的影响

魏 薇 ， 莫孔源 ， 刘 娟 , 陈 晓

(西南大学荣昌校区兽医科学工程研究中心中药创新研究室 ， 重庆荣昌402460)

为了探讨翁苋颗粒对雏鸡感染鸡白痢后疗效及IL-2、IFN-γ的影响， 采用腹腔注射鸡白痢沙门菌菌液的方法人工复制鸡白痢的病理模型， 通过在饲料中添加一定比例的翁苋颗粒， 于试验前、 攻毒后、 试验后各组随机取雏鸡抽取心血， 分离血清检测雏鸡IL-2、 IFN-γ的含量。 结果翁苋颗粒高剂量组、 阳性药物组对雏鸡白痢的治愈率、 有效率最高。 与空白组比较， 模型组雏鸡IL-2的含量升高， 差异极显著(P<0.01)， IFN-γ的含量无显著性差异； 与模型组比较， 翁苋各组雏鸡IL-2的含量降低， 差异极显著(P<0.01)， IFN-γ的含量无显著性差异。 表明翁苋颗粒能防治雏鸡白痢， 其作用与促进雏鸡体液免疫水平， 增强其非特异性免疫功能有关。

翁苋颗粒 ； 鸡白痢 ； IL-2 ； IFN-γ

鸡白痢是危害养鸡业最严重的细菌性疾病之一。其传播范围广，感染鸡只多，严重地威胁集约化养鸡业的发展，给养鸡业带来巨大的经济损失。本试验在本教研室前期工作的基础上，通过筛选和比较，将白头翁等中草药按照一定比例进行配伍组成方剂翁苋颗粒。前期试验证实了翁苋颗粒对鸡白痢沙门菌有很好的抑菌作用，为进一步用于临床，笔者等探讨了翁苋颗粒对雏鸡感染鸡白痢后IL-2、IFN-γ及血液生理指标的影响，为临床用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物和菌种 120只健康三黄鸡，购自四川刘氏种禽场，雌雄各半，体质量45.4～46.0 g。鸡白痢沙门菌临床分离株由西南大学荣昌校区微生物实验室提供。

1.2 试验药品及仪器 翁苋颗粒：由西南大学荣昌校区兽医科学研究中心中药创新研究室研制；鸡痢灵散：广东省天宝生物制药有限公司，批号：20141101。鸡IL-2酶联免疫分析试剂盒：上海瑶韵生物科技有限公司，批号：201606。鸡IFN-γ酶联免疫分析试剂盒：上海瑶韵生物科技有限公司，批号：201606。Model 680酶标仪(BiO-Rad)、BA 200光学显微镜(麦克奥迪实业集团有限公司)；SW-CJ-1BU型洁净工作台(苏净集团苏州安泰空气技术有限公司)。

1.3 试验分组及处理 将120只1日龄雏鸡随机分为空白组，模型组，翁苋颗粒高、中、低剂量组和阳性药物组，每组20只。空白组、模型组给予生理盐水，翁苋颗粒高、中、低剂量组分别给予0.5g/只，0.3g/只与0.1g/只的用量拌料饲喂，阳性药物组给予0.5g/只鸡痢灵散拌料饲喂，2次/d，连续7 d后，各药物组与模型组雏鸡腹腔注射含4.9×107CFU鸡白痢沙门菌的菌液进行体内攻毒。随后，各药物组继续用药7 d。

模型建立判定标准，参考文献[1]，攻毒12 h后雏鸡闭眼昏睡,呆立或趴卧不起,或拥挤成一团,两翅下垂,精神委顿；攻毒后24～48 h雏鸡大量死亡,死亡鸡的肛门被白色粪便污染。剖检死亡雏鸡发现肝脏充血肿大,甚者变黑,有的表面有灰白色坏死点，直肠膨胀,有白色稀粪存积，卵黄吸收不良。细菌学检查：在麦康凯琼脂平板上长成较密集的圆形、光滑、湿润和半透明的无色小菌落。显微镜下可见粉红色、两端钝圆的小杆菌,无荚膜和鞭毛,没有运动性。

疗效判定标准，参考《中医病症诊断疗效标准》与文献[1]，(1)有效率：在试验期间,给药后鸡的精神状态好转、食欲恢复；(2)治愈率：在试验期间,给药后鸡的精神状态、食欲恢复正常,不再出现白色稀粪等临床症状；(3)无效率：在试验期间,出现鸡白痢的临床症状及粪便镜检无改善。

1.4 采样及检测 各试验组雏鸡在试验前、攻毒后、试验后随机抽取4只，取雏鸡心血离心血清备用，用鸡IL-2、IFN-γ酶联免疫分析试剂盒检测雏鸡血清中IL-2、IFN-γ的含量。

1.5 数据处理 试验数据用SPSS20.0统计软件进行显著性检验和方差分析。

2 结果

2.1 模型建立与防治效果 试验结果显示，攻毒后模型组雏鸡排出白色下痢粪便，抽取雏鸡病理剖检和细菌学检查均符合造模成功的标准。阳性药物组与翁苋颗粒高、中剂量组雏鸡未出现典型鸡白痢症状，翁苋颗粒低剂量组少数雏鸡精神、食欲不佳。翁苋颗粒高剂量、阳性药物组对鸡白痢雏鸡有效率、治愈率最高，均为91.7%。翁苋颗粒中剂量、低剂量组有效率均为83.3%，治愈率分别为83.3%、75%。

2.2 翁苋颗粒对雏鸡感染鸡白痢后血液中IL-2含量的影响 试验结果显示，模型组雏鸡血液中IL-2的含量升高，与空白对照组相比，差异极显著(P<0.01)。翁苋高、中剂量组、阳性药物组雏鸡血液中IL-2的含量无异常变化，与模型组相比，差异极显著(P<0.01)，与空白对照组相比，差异不显著(P>0.05)。翁苋低剂量组雏鸡血液中IL-2的含量升高，与空白对照组、模型组相比，差异极显著(P<0.01)。结果证实，翁苋颗粒能抑制鸡白痢感染雏鸡IL-2的过度分泌,见表1。

表1 对雏鸡感染鸡白痢后血液中IL-2含量的影响 (ng/L,X±SD)

注：同列数值有相同字母者差异不显著(P>0.05)，不同小写字母之间差异显著(P<0.05)，不同大写字母之间及大小写字母之间差异极显著(P<0.01)

2.3 翁苋颗粒对雏鸡感染鸡白痢后血液中IFN-γ含量的影响 试验结果显示，模型组雏鸡血液中IFN-γ含量与空白对照组相比，差异不显著(P>0.05)。翁苋各组雏鸡血液中IFN-γ含量与模型组、空白对照组相比，差异不显著(P>0.05)。结果说明雏鸡在感染鸡白痢后，IFN-γ的含量不受影响，未通过IFN-γ介导免疫应答的途径,见表2。

3 讨论与结论

TLRs受体通过识别不同病原微生物上的保守序列病原相关分子模式，激活先天性免疫系统产生亲炎症细胞因子[2]。不同的TLRs特异性结合自身配体 /PAMP 后，通过MyD88依赖性或非依赖性途经激活下游一系列蛋白级联反应，将刺激信号转导至细胞核内，诱导相应细胞因子如IL-2、干扰素等合成与释放[3]。其中TLR4可识别LPS并诱导参与特异性免疫应答的主要抗原递呈分子树突细胞DC的成熟，其在树突细胞上的活化及表达将决定Th细胞的生成类型，即Th1或Th2。细胞因子可诱导Th1和Th2为主的T细胞的增殖和分化，启动机体的后天免疫系统。细胞因子IL-2是T细胞生长因子，主要由Th1产生[4]。IL-2具有多种免疫增强效应，在众多细胞因子网络中起重要作用，能维持活化的T细胞、巨噬细胞和NK细胞的生长及增殖，诱生分泌多种细胞因子，对细胞免疫和体液免疫均有重要作用。因而雏鸡感染鸡白痢后，IL-2的含量会在一定程度上受到影响[5]。IFN-γ是由活化的NK细胞和T淋巴细胞等分泌的一种低分子可溶性糖蛋白，可以激活血管内皮细胞、NK细胞和巨噬细胞，能直接作用于T、B淋巴细胞，促进分化。此外，IFN-γ是一种免疫调节的多效性因子，哺乳动物和禽IFN-γ被用作感染机体的细胞介导免疫的指示器[6]。Th1细胞通过分泌IFN-γ，在一定程度上促进细胞介导的免疫应答[4]。本研究显示，雏鸡感染沙门菌后LPS激活免疫系统，诱导了IL-2的产生，IL-2的含量升高。翁苋高、中剂量组IL-2的含量降低，推测翁苋颗粒能够抑制沙门菌内毒素引起的细胞因子过度分泌，对雏鸡体液免疫具有显著增强作用，能提高其非特异性免疫功能。各组雏鸡血液中IFN-γ的含量均无显著性差异，可能试验雏鸡在感染鸡白痢后，没有通过Th1细胞分泌IFN-γ介导免疫应答的途径。

表2 对雏鸡感染鸡白痢后血液中IFN-γ含量的影响 (ng/L,X±SD)

综上所述，翁苋颗粒能防治雏鸡白痢，其作用与促进雏鸡体液免疫水平，增强其非特异性免疫功能有关。

[1] 肖永霞,刘焕琦,邹明.白痢净口服液对人工诱发雏鸡白痢的临床效果观察[J].黑龙江畜牧兽医,2009(23):117-118.

[2] 周红光,陈海彬,吴勉华.从Toll样受体/核因子-κB信号通路探讨中药免疫调节作用机制[J].中国中西医结合杂志,2010,30(8):884-888.

[3] 彭广华,贺新怀,席孝贤,等.从Toll样受体探讨中药抗感染免疫作用机制[J].中医药学刊,2006,24(11):2084-2085.

[4] 杨汉春.动物免疫学[M].2版.北京：中国农业大学出版社,2003:99.

[5] 王自力,鲁琳,朱晓宇,等.中药复方对鸡免疫器官指数及IL-2表达的动态影响[J].中国兽医科学,2007,37(6):543-546.

[6] 栾维民,杨树宝,顾玉宝,等.鸡肠相关性淋巴组织中IFN-γ和IL-2 mRNA表达的动态变化[J]. 中国兽医科学,2011,41(3):292-297.

Effect of Weng Xian Granule on IL-2 and IFN-γ for Pullorosis

WEI Wei , MO Kong-yuan , LIU Juan , CHEN Xiao

(Traditional Chinese Medicine Innovation Laboratory,Veterinary Science Engineering Research Center,Southwest University,Chongqing 402460,China)

To investigate the Weng Xian granule on the expression of IL-2 and IFN-γ after chicks infected with salmonella. Healthy chicks were infected with pullorosis salmonella bacteria though intraperitoneal injection to develop pullorosis, and Weng Xian granule was supplemented into feed in certain ratio. Chicks were randomly selected to draw blood samples from hearts to detect the content of IL-2 and IFN-γ before and after treatment. The cure rate and efficient of pullorosis were the highest in Weng Xian granule high dose group,positive drug group. Compared with the blank group, the content of IL-2 was significantly higher in model group, but(P< 0.01), there was no significant difference for IFN-γ. Compared with the model group, the content of IL-2 lower significantly in Weng Xian each group(P< 0.01), but there was no significant difference for IFN-γ content.Weng Xian granule can prevent and treat pullorosis, and its action is likely to promote humoral immune level in chicks and strengthen the nonspecific immune function.

Weng Xian granule ; pullorosis ; IL-2 ; IFN-γ

LIU Juan

2016-11-01

国家公益性行业(农业)科研专项(201303040-05)；农业部科技基础性专项(2013FY110600-03)

魏薇(1991-)，女，硕士，从事中兽医药研究，E-mail：1587291514@qq.com

刘娟，E-mail：liujrc@163.com

S858.31

A

0529-6005(2017)05-0069-03