刘晓敏，汪 琪，杨海明，宫晓倩，阮宝阳，张 鹏，单同领，童 武，童光志，于 海

·研究论文·

禽源H9N2亚型猪流感病毒反向遗传操作技术平台的建立

刘晓敏，汪 琪，杨海明，宫晓倩，阮宝阳，张 鹏，单同领，童 武，童光志，于 海

利用RT-PCR技术扩增了禽源H9N2亚型猪流感病毒A/Swine/Guangxi/7/2007（H9N2）的8个目的基因片段，分别克隆至pBD双向转录表达载体。将8个重组质粒纯化后共转染293T细胞，54 h后收集上清，接种MDCK细胞。当拯救的病毒在MDCK细胞上增殖至第3代时，收集的细胞上清经检测具有血凝效价。经过测序分析，确定获救病毒的8个基因片段序列与野生株完全一致，表明病毒拯救成功。禽源H9N2亚型猪流感病毒反向遗传操作技术平台的成功建立为探索猪流感病毒致病机理、传播机制与基因功能研究奠定了基础。

猪流感病毒；H9N2；RT-PCR；病毒拯救；反向遗传操作平台

猪流感（swine influenza，SI）是由正粘病毒科、A型流感病毒属的猪流感病毒（Swine influenza virus，SIV）引发的一种急性、传染性呼吸道疾病，一年四季均可流行，但易爆发于晚秋、冬季、早春[1]，临床上主要表现为突发、高热、咳嗽、呼吸困难、反复发作、衰竭。SI一直在猪场中普遍存在且难以根除，同时容易与其他呼吸道细菌或病毒疾病，如猪呼吸与繁殖综合征、猪链球菌、猪传染性胸膜肺炎等继发或混合感染，导致病情严重化，死亡率升高，严重影响患猪健康状态与生产性能，对养猪业危害极大[2]。由于猪呼吸道上皮细胞表面同时存在禽流感和人流感病毒受体SAa-2,3-Gal和SAa-2,6-Gal，所以禽流感和人流感病毒均可感染猪，导致猪在流感病毒的种间传播过程中，扮演着“中间宿主”的角色，成为流感病毒不同毒株发生基因重组的“混合器”以及新流行毒株产生的“孵育器”，对人类健康也造成极大的潜在威胁[3,4]。……