张跃军 蒋传好 刘良专 蒋最明 顾 敏 吴移谋

(湖南省株洲市中心医院临床检验中心，株洲412007)

梅毒螺旋体膜蛋白Tp0971经TLR2/NF-κB诱导巨噬细胞分泌细胞因子①

张跃军 蒋传好②刘良专②蒋最明 顾 敏 吴移谋②

(湖南省株洲市中心医院临床检验中心，株洲412007)

目的：探讨梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)膜蛋白Tp0971诱导巨噬细胞分泌细胞因子的分子机制。方法：以Tp Nichols株基因组为模板，PCR扩增Tp0971基因并构建重组质粒pET28a(+)/Tp0971，随后将其转化至表达宿主菌E.coli Rosseta中，IPTG诱导表达，Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白。经去除Tp0971重组蛋白中的内毒素后，将其刺激巨噬细胞，ELISA检测细胞因子IL-8、IL-1β和IL-6的分泌水平。并采用Toll样受体2(TLR2)中和抗体或TLR2 siRNA，以及核转录因子κB(NF-κB)抑制剂PDTC处理细胞，观察TLR2和NF-κB在介导细胞因子分泌中的作用。结果：成功构建pET28a(+)/Tp0791原核表达载体，并表达出一相对分子量为29 kD的重组蛋白。ELISA结果显示，0.5～10 μg/ml Tp0791能以剂量依赖性方式诱导巨噬细胞分泌IL-8、IL-1β和IL-6。采用siRNA沉默TLR2表达，或用TLR2中和抗体封闭后，IL-8、IL-1β和IL-6分泌明显减少。此外，Tp0791也能增加细胞核中NF-κB p65的表达水平，采用NF-κB抑制剂PDTC处理后，细胞因子分泌水平也显著降低。结论：Tp0971经TLR2/NF-κB可诱导巨噬细胞分泌细胞因子。

梅毒螺旋体；膜蛋白；细胞因子；Toll样受体2

梅毒螺旋体(Treponema pallidun,Tp)是导致性传播疾病梅毒的病原体，它不仅可导致人体多器官损害，同时也可经胎盘由母体垂直传播给胎儿，从而导致先天性梅毒的发生，给出生人口质量带来极大危害[1,2]。目前Tp的致病机制尚未完全明了，探讨其致病因子的生物学作用是防治本病的关键环节。研究表明，Tp感染后的炎症和持续的获得性免疫应答是导致机体病理损伤的主要因素[3]。……