王永刚 ， 魏清伟， 马雪青， 麻 慧， 孙尚琛， 冷非凡

(1.兰州理工大学 生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730050；2.中国农业科学院 兰州兽医研究所，甘肃 兰州 730046；3. 兰州兰石能源装备工程研究院有限公司，甘肃 兰州 730000)

超声波介导质粒pET28a转化枯草芽胞杆菌的研究

王永刚1， 魏清伟1， 马雪青2， 麻 慧1， 孙尚琛3， 冷非凡1

(1.兰州理工大学 生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730050；2.中国农业科学院 兰州兽医研究所，甘肃 兰州 730046；3. 兰州兰石能源装备工程研究院有限公司，甘肃 兰州 730000)

揭示超声波介导下质粒DNA转化枯草芽胞杆菌发生的生物学机制，以便于枯草芽胞杆菌基因工程菌株的工业化应用。建立超声波介导质粒pET28a转化枯草芽胞杆菌的一种方法，采用扫描电镜结合理化分析检测技术研究超声波处理前后细胞的变化。结果显示，一定条件的超声(40～100 W)处理后的质粒DNA可以转化枯草芽胞杆菌，处理后的细胞在电镜下表面凹凸不平，出现褶皱现象；而且胞内蛋白质、磷脂及碱性磷酸酶(AP)大量释放至胞外。结果表明，超声波介导的DNA转化是细胞生理响应与超声波共同作用的结果。

超声波；转化；生物学机制

外源DNA转化进入受体细胞是分子克隆的关键步骤，也是分子生物学发展的热点之一。目前，超声波介导的DNA转化方法主要被应用于革兰阴性菌中，Song等[1]首次采用超声波介导法成功将质粒DNA转化至革兰阴性菌PseudomonasputidaUWC1、EscherichiacoliDH5α和PseudomonusfluorescensSBW25中，而且P.putida的转化频率分别是电转化法的4倍、接合转化法的9倍[2]。革兰阳性菌B.subtilis具有质粒DNA复制能力强、原生质体制备与再生能力较强等特点，一直被作为一种模式生物应用于细胞融合研究。……