于泽奇+武慧丽+涂悦+衣泰龙+杨小飒+张赛+程世翔

[摘要] 目的 探讨受体相互作用蛋白3（RIP3）在神经胶质瘤细胞中的表达及其对U251细胞增殖的影响。 方法 采用实时定量PCR（real-time RT-PCR）法分别检测神经胶质瘤A172、U251、U373和U87细胞中RIP3的表达水平，随后应用U251稳定过表达RIP3（U251-RIP3）细胞模型，分别采用MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力，流式细胞仪评价细胞周期变化。结果 RIP3 mRNA在4株胶质瘤细胞（A172、U251、U373、U87）中均有表达，并在U251细胞中表达最低。real-time RT-PCR结果表明U251-RIP3细胞中稳定过表达RIP3，与阴性对照（空载）（NC）相比，RIP3过表达能够抑制U251细胞增殖能力；能够降低U251细胞克隆形成能力，培养11 d后细胞集落数目（67±2）較NC（75±3）减少（P < 0.05）；能够延缓细胞周期进程，U251-RIP3细胞的S期比例较NC组（16.0±0.4）%升至（18.2±1.0）%（P < 0.05），同时G0/G1期比例较NC组（55.7±0.5）%降至（57.4±0.4）%（P < 0.01）。 结论 RIP3过表达后可抑制神经胶质瘤U251细胞增殖，有望成为靶向控制胶质瘤细胞增殖的潜在治疗靶点。

[关键词] 受体相互作用蛋白3；胶质瘤；细胞增殖；可控性坏死

[中图分类号] R739.41 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）04（a）-0004-04

[Abstract] Objective To investigate the expressive changes of RIP3 in all sorts of glioma cell lines and the effects on the cell proliferation in the U251 cells. Methods The expression levels of RIP3 mRNA in the four glioma cell lines （A172， U251， U373 and U87） were firstly selected by real-time RT-PCR. Then， U251 cells were engineered to overexpress RIP3 for further study. Lastly， the MTT， colony formation， and flow cytometry assays were used to detect the effects of RIP3 on the cell proliferation， clone formation， and cell cycle of U251 cells， respectively. Results The expression levels of RIP3 mRNA was detected in all four glioma cell lines， and the lowest level of it was discovered in U251 cell line. Then， real-time RT-PCR assay showed that RIP3 was successfully overexpressed in U251-RIP3 cells compared with negative control （NC） cells with empty vector. The overexpressed RIP3 altered the cell viability in U251 cells， Additionally， the overexpressed RIP3 also reduced the colony formation of U251 cells： after 11 d of cell culture， the colony number of U251-RIP3 cells （67±2） was significantly decreased compared with that of NC cells （75±3） （P < 0.05）. Correspondingly， the proportion of U251-RIP3 cells in S phase arrest was higher than that in NC cells [from （16.0±0.4）% to （18.2±1.0）% ] （P < 0.05）. Meanwhile， that in G0/G1 phase was reduced compared with that in NC cells [from （57.4±0.4）% to （55.7±0.5）%] （P < 0.01）. Conclusion Studies suggested that the overexpression of RIP3 could confer inhibition to the cell proliferation in glioma U251 cells； and it indicated that RIP3 may be as a potential target for glioma chemotherapy.

[Key words] Receptor-interacting protein 3； Glioma； cell proliferation； Regulated necrosis

脑肿瘤占中枢神经系统肿瘤的90%以上[1]，而神经胶质瘤（gliomas）是最常见的脑肿瘤。近20年来，胶质瘤患者中位生存期无明显改善，其高复发率成为治疗的最大难题[2]。随着医学的飞速发展，使我们对肿瘤的发生机制有了更深入的了解，同时也提供了肿瘤治疗的新策略和新手段，其中基因治疗被认为是前景广阔的一种治疗方式，已成为神经科学中最富挑战而又亟待解决的课题。

受体相互作用蛋白3（receptor-interacting protein 3，RIP3）是受体相互作用蛋白家族（RIPs）的重要成员。激活状态下的RIP3 能够调控细胞可控性坏死以及炎症的发生[3]。研究表明，RIP3在丘脑、黑质、胼胝体、壳核、延髓和脊髓中呈现高表达水平，提示RIP3可能在神经系统发育和疾病进程中扮演着重要角色[4]。近年来，RIP3在多种肿瘤（例如肝癌、肺癌、胶质瘤等）中发挥的重要作用受到广泛关注[5-7]，然而，RIP3对肿瘤细胞的功能影响尚存在争议。……