缪 静 孙 磊 李维焕 程显好*

（1鲁东大学生命科学学院，山东烟台264025；2鲁东大学农学院，山东烟台264025）

茶树菇（Agrocybe cylindracea），又称茶薪菇，是一种生长于亚热带地区的土生木腐菌，其盖肥柄脆，营养极其丰富，蛋白质含量高达19.55%，且具备人体必需的8种氨基酸，并且有丰富的B族维生素和钾、钠、钙、镁、铁、锌等营养元素。研究表明茶树菇具有抗衰老、抗氧化、提高免疫力、抗肿瘤、降血脂等作用，因此又具有较高的药用价值，是一种极具开发潜力的珍稀食药用菌[1]。

菌种扩大培养，目前行业中大多以PDA培养基作为菌种扩繁的主要培养基，但不同种类的菌种有其各自适宜的生长环境。笔者对茶树菇菌种的固体培养条件进行了初步的探索，以菌落直径法[2-5]和菌丝干重法[6-7]为主要评价指标，优化了培养基、温度、pH等培养条件。研究为茶树菇菌种的扩大培养提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料①供试菌株：茶树菇LA006，由鲁东大学菌物科学技术研究院菌种室保存。②培养基：GPY固体培养基（L） 葡萄糖20 g，蛋白胨6 g，酵母膏10 g，琼脂10 g，pH 6.0。

PDA固体培养基（L） 马铃薯200 g（煮汁），葡萄糖20 g，琼脂10 g，pH 6.0。

GPC固体培养基（L） 葡萄糖20 g，蛋白胨6 g，玉米浆10 g，琼脂10 g，pH 6.0。

麦芽汁固体培养基（L） 每升麦芽汁（固形物5.0%）中加入琼脂10 g，pH 6.0。

胡萝卜固体培养基（L） 胡萝卜200 g（煮汁），葡萄糖20 g，琼脂10 g，pH 6.0。

麸皮固体培养基（L） 麸皮30 g（煮汁），葡萄糖20 g，K2HPO43 g，MgSO41.5 g，琼脂10 g，pH 6.0。

1.2 试验方法

1.2.1 菌种活化 无菌条件下，将保存的茶树菇菌种接种于PDA斜面培养基上，25℃避光培养5～7 d，备用。将活化后的斜面菌种接种于平板的正中央，25℃避光培养9～10 d，备用。

1.2.2 培养基和pH筛选 培养基见1.1。设置pH分别为4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0六个梯度。培养温度为25℃，每个梯度做三个平行样。分别用菌落直径法和菌丝干重法测定各处理条件下菌丝生长情况。

1.2.3 温度筛选 培养温度分别设置19℃、22℃、25℃、28℃、31℃五个梯度，在pH6.0条件下，于GPY培养基上进行培养。每个温度梯度做三个平行样。用菌落直径法和生物量法分别测定不同温度条件下菌丝的生长状况，并进行比较。

1.3 测定方法

1.3.1 菌落直径测定法 无菌条件下，将活化后平板培养的菌丝用5 mm打孔器沿着外周打孔，取生长最旺盛的平板菌落边缘菌丝块，在平板上铺一层灭菌玻璃纸，然后将菌块接到六种已铺好玻璃纸的培养基正中央，定期测量菌落直径大小，每个平板分别用直尺沿平板底部相互垂直的两个方向测量，取平均值。

1.3.2 菌丝生物量测定法 打孔器取种接种方法同1.3.1。定期进行测量。每次取每种培养基的3个平板进行测量，将铺在培养基上的玻璃纸揭下来，将菌丝仔细刮下，置于干燥箱中60℃烘干至恒重，用电子天平称重。

2 结果与分析

2.1 不同培养基及pH对菌丝生长的影响比较培养至第11天时，不同培养基及pH下的菌丝生长量，结果见表1、2。

以菌落直径法测定结果（表1）可以看出，茶树菇菌丝在六种培养基上都能生长，且生长相对较快；总体上，麦芽汁培养基上菌丝生长速度最快，PDA培养基上菌丝生长速度是相对较慢。

由表1可知，麦芽汁培养基茶树菇菌丝生长速度与其他几种培养基条件下菌丝生长速度差异显著；麸皮培养基的菌丝的生长速度仅次于麦芽汁培养基菌丝的生长速度，且与其他几种培养基差异极显著。

由表2可以看出，GPY培养基上茶树菇菌丝的生物量明显高于其他几种培养基上菌丝的生物量；菌丝在不同培养基上生物量的积累量总体表现为GPY＞GPC＞麸皮＞PDA＞胡萝卜＞麦芽汁。

同时，GPY培养基条件下菌丝的生物量与其他几种培养基条件下菌丝的生物量达到极显著的差异。

不同pH对茶树菇菌丝生长的影响（表1）总体上，pH6.5-pH7条件下菌丝生长速度相对较快，说明这一pH范围内适合菌丝的生长；同样pH6.5麦芽汁培养基，菌丝生长速度最快，因此，应选择这一条件作为菌丝生长的最适培养条件；不同培养基上菌丝的生长速度大致表现为麦芽汁＞麸皮＞GPY＞GPC＞胡萝卜＞PDA；在麦芽汁培养基上，不同pH条件下菌丝的生长速度总体表现为pH6.5＞pH5.5＞pH7＞pH6＞pH5＞pH4.5，随pH升高，呈现先上升后下降的趋势。

对不同pH条件下菌丝生长（菌落直径）进行差异分析，结果表明，pH6-pH7条件下，菌丝生长速度与其他几种pH条件菌丝生长速度达到显著差异，因此这一pH范围都可作为菌丝的适合生长pH条件；而pH4.5菌丝生长状况与其他pH条件下菌丝生长状况达到显著差异，菌丝生长速度慢。因此，最不适合作为菌丝培养的pH条件。结合表1中麦芽汁中菌丝生长状况可知，应选pH6.5作为菌丝生长的最适生长pH。

由表2可知，菌丝生物量最高为GPY培养基，pH6培养条件。总体上，同一培养基菌丝的生物量pH低高于pH高。

表1 p H对菌丝生长（菌落直径）的影响 单位：cm

表2 p H对菌丝生物量的影响 单位：mg

通过对不同培养基和不同pH条件下菌丝生物量的两因素方差分析显示，不同pH下菌丝生物量差异不显著（P=0.134），所以，pH对菌丝生物量的积累影响较小；从表2可知，培养基GPY、pH6时菌丝生物量最高，为试验最适菌丝培养条件。

2.2 温度对菌丝生长的影响由表3可知，培养温度28℃时，菌丝生长速度最快，因此为菌丝培养最适宜的温度；菌丝的生长速度随温度的升高有先上升后下降的趋势。

根据显著性分析可知，在各个温度条件下菌丝生长速度差异都达到显著水平，说明，菌丝的生长速度受温度的影响较大。

由表3可知，在培养温度28℃时具有最大的菌丝生物量；温度低于19℃以下，菌丝生长缓慢，受到严重抑制；随温度的升高，菌丝干重状况呈现先上升后下降的趋势。

根据显著性分析可知，19℃条件下菌丝生长生物量积累少，且与其它培养温度差异显著，因此，不适合作为菌丝培养的温度。28℃为菌丝生长的最适温度条件。

表3 培养温度对菌落直径和菌丝生物量的影响

3 小结与讨论

以两种菌丝生长测定方法考察优化茶树菇菌种斜面培养基，其结果在培养温度方面差异较小。菌落直径法选择的结果，麦芽汁培养基pH6.5条件下，菌丝生长速度最快。菌丝干重法选择的结果，GPY固体培养基pH6条件下，菌丝生物量最高。结合表1、2可知，麦芽汁培养基培养，菌丝生长速度最快，但其生物量却很低，可以推测，在这种培养基条件下菌丝徒长，品质低。GPY固体培养基中菌丝生长速度虽不及麦芽汁培养基，但其生物量却远远高于麦芽汁培养基，说明此条件下，菌丝生长茂盛、分支多质量好，适合作为菌种使用。因此，综合考虑，建议选择GPY固体培养基为最适培养基。

综上所述，茶树菇菌种最适固体培养条件为28℃、GPY培养基、pH6。