柯长征

江西省瑞昌市血吸虫病防治站

华支睾吸虫囊蚴在活鱼体存活时间实验观察

柯长征

江西省瑞昌市血吸虫病防治站

目的观察华支睾吸虫囊蚴在活鱼体存活时间。方法人工养殖麦穗鱼获得第二代鱼，用华支睾虫卵感染纹沼螺获得华支睾吸虫尾蚴，并将尾蚴感染第二代鱼,观察华支睾囊蚴在活鱼体存活时间。结果鱼体华支睾囊蚴数目－年后逐渐减少，三年后基本消失。结论华支睾囊蚴在活鱼体第＋三个月逐渐减少，四十四个月基本消失。

华支睾囊蚴；麦穗鱼；存活时间；实验观察

关于华支睾吸虫囊蚴的研究有不少报道：例如华支睾吸虫囊蚴在不同条件下存活的观察[1]，鱼体华支睾吸虫囊蚴自然感染状态及保存液中存活情况[2]，华支睾囊蚴在不同温度及醋、醬油生存时间[3]，自然干燥对鱼体华支睾吸虫囊蚴感染性的初歩观察[4]，华支睾吸虫囊蚴在活鱼体存活时间：认为自然感染华支睾吸虫囊蚴的白皖鱼苗，在没有再感染的条件下饲养，从第三个月开始鱼体囊蚴数目逐渐减少，一年后基本消失[5]。华支睾吸虫由囊蚴感染终宿主，为深入了解华支睾囊蚴在活鱼体存活时间，我们持续了6年实验观察。

一、材料与方法

1.获得第二代麦穗鱼

2011年1月，在室外建造3.8m x 3.6m x 1.3m大小能溶17.8m3水量的养鱼池，池底备有可供鱼越冬或避署设施,从未有华支睾吸虫易感螺的池塘取水于池内。同年4月,在当地捕获麦穗鱼[6]30条放入池中产卵，6月见有鱼苗孵出，12月去除母鱼，保留300条第二代鱼苗继续饲养。

2.获得华支睾吸虫尾蚴

2011年4月，从华支睾吸虫疫区[7]捕获麦穗鱼28条，用玻片压片法镜检，见有华支睾吸虫囊蚴，再用人工消化液[8]将鱼体消化，获取华支睾吸虫囊蚴400个，用1只成年中华田园犬[9]食入感染。2012年4月中旬，从当地拾取纹沼螺[10]100只，在室内进行人工养殖，5月中旬获取第二代幼螺200只，用于感染华支睾吸虫虫卵。2012年6月上旬，幼螺壳高长至2㎜-3㎜，解剖感染犬，取其肝胆管及胆囊內虫卵，水洗沉淀后采用点滳毫升计数法，按1:30螺、卵比例，将200只幼螺和6000个虫卵感染48h。同年8月获得大量华支睾吸虫尾蚴。

3.获得华支睾吸虫囊蚴

2012年9月中旬，将以上200只正在逸出华支睾尾蚴的纹沼螺和300条第二代麦穗鱼，同养于－玻璃缸中，让尾蚴感染麦穗鱼10天，然后把感染有华支睾吸虫尾蚴的鱼放回到养鱼池中饲养。－个月后从鱼池中捕鱼1条重量3g,取鱼肉玻片压片法镜检,査见342个发育成熟的华支睾吸虫囊蚴。

鱼池中感染有华支睾囊蚴的麦穗鱼,经常投食物喂养，向池内补充池塘水。需要观察池中鱼体囊蚴时，采用鱼笼透捕法，控制透捕鱼数,减少伤害整池鱼。每年年底将池中水排干，清除新增殖的鱼苗，防止影响观察鱼体囊蚴存活时间的效果。

4.观察鱼体囊蚴减少

2012年10月下旬，从鱼池中捕鱼6条，在鱼背部相同部位各取0.2g鱼肉玻片压片法镜检，囊蚴计数,获取6条鱼囊蚴平均数（表1）。

确定6条鱼平均22个囊蚴之后,每月定时捕相同鱼数和用同样检査方法观察鱼体囊蚴一次，当发现鱼体囊蚴数平均少于22个，再从池中捕6条鱼观察,鱼体囊蚴仍然不足22个,则视为鱼体囊蚴数开始减少。

5.观察鱼体囊蚴消失

鱼体囊蚴减少之后，改捕1条鱼每月定时观察，取0.2g鱼肉玻片压片法镜检，囊蚴计数。若0.2g鱼肉不见囊蚴，取鱼肉再检，整条鱼不见囊蚴，从鱼池中再捕鱼镜检，以见到活囊蚴为止。池中鱼仍找不到囊蚴，则视为鱼体囊蚴消失。

二、结果

1.鱼体囊蚴减少

2012年10月下旬开始，每月从池中捕鱼6条，在鱼背部的相同部位各取0.2g鱼肉玻片压片法镜检，观察鱼体囊蚴数量变化。结果在2013年10月鱼体囊蚴不足22个平均数（表2），故视为鱼体囊蚴从第十三个月开始减少。

2.鱼体囊蚴消失

2012年10月下旬，鱼肉玻片压片法镜检，华支睾囊蚴呈淡黄色，结构清晰，排泻囊活动，几乎全是活囊蚴。冬季排泻囊停止活动，加温时排泻囊不停转动，是低温环境识别囊蚴活性的方法之一。2013年9月，偶尔见有囊壁清楚，囊內成片状浅黑色，结构模糊,呈死亡状态；有的囊蚴－端缺失，有的仅剩囊壁框架，囊体分解。2014年8月，鱼体囊蚴减少明显，鱼体表层囊蚴比深部鱼肉囊蚴消失快,冬季较夏季减少慢。2015年8月，见有整条鱼囊蚴完全消失，鱼体囊蚴显著减少。2016年6月，一次性鱼肉玻片压片法镜检52条鱼，并将取过鱼肉的剩余用消化液消化后观察，皆未找到华支睾囊蚴，初歩认定华支睾吸虫囊蚴在活鱼体存活44个月。

表1 镜检6条鱼囊蚴数

表2 2012－2016年华支睾囊蚴（个）在鱼体消减情况

三、讨论

本次实验用华支华睾吸虫尾蚴感染人工养殖的第二代麦穗鱼获得华支睾吸虫囊蚴，经持续观察华支睾吸虫囊蚴在活鱼体存活时间，结果鱼体囊蚴数目－年后逐渐减少，三年后基本消失；与以往鱼体囊蚴数目三个月逐渐减少，一年后基本消失的观察结果相差较大。以往是捕获自然感染了华支睾吸虫的白皖鱼苗，在没有再感染的条件下饲养，认为难以确定华支睾吸虫尾蚴感染鱼体时间，还可能与饲养鱼体囊蚴的水质、水量及水溫等生存条件有关。华支睾吸虫囊蚴可寄生多种鱼类[11]，华支睾囊蚴在鱼体存活时间的长短，影响华支睾吸虫病的流行动态。华支睾吸虫全球感染者数以千万计，我国占多数，并呈上升趋势[12]。因此，观察华支睾吸虫囊蚴在活鱼体存活时间，在流行病学上有重要意义。

[1]袁维华，王义森，高炎标.华支睾吸虫囊蚴在不同条件下存活的观察[J].中囯人兽共患病杂志,1988，4（3）：56-57.

[2]吴军，阮彩文，崔惠儿，等.鱼体华支睾吸虫囊蚴自然感染状态及保存液中存活情况[J].中国人兽共患病杂志，2004，20（2）：132.

[3]吴征鉴.华支睾吸虫与支睾吸虫病[M].中国医学百科全书，上海科学技术出版社，1983，10：64.

[4]朱华，寿干城，段芸芬.自然干燥对鱼体华支睾吸虫囊蚴感染性的初歩观察[D].浙江省医学科学院学报，1991，9：31.

[5]赵慰先.华支睾吸虫[M].人体寄生虫学，1版，北京，人民卫生出版社，1983，7：460.

[6]陈家平.广水市肝吸虫病流行病学调査[J].中国公共卫生, 1991，（2）：96.

[7]贺中式.儿童华支睾吸虫病316例临床分析[J].江西医药，1983,1：4-6.

[8]李道宁.检查囊蚴鱼肉消化法的改进[J].中国寄生虫病防治杂志，1992，3，5（1）：48.

[9]彭志梅，楊建平，宜春滩下肝吸虫病流行调査[J].江西医药, 1981,1:52-53.

[10]李秉正,王翠霞,李得恒，等.辽宁省肝吸虫第－中间宿主纹沼螺的生态研究[J].动物学杂志,1983,（1）：19-23.

[11]马仁祥.近三十年来我国肝吸虫流行病学研究进展[D].河南卫生防疫，1979，（1）：48-63.

[12]钱门宝，周晓农，方悦怡，等.加强中国华支睾吸虫病研究[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2011,6,29（3）：211-213.

柯长征（1957-），男，汉族，江西瑞昌人，主治医师，大专，江西省瑞昌市血吸虫病防治站，研究方向：寄生虫防治。