鲁振华，牛良，张南南，崔国朝，潘磊，曾文芳，王志强

（中国农业科学院郑州果树研究所/国家桃葡萄品种改良中心/农业部果树育种技术重点实验室，郑州 450009）

基于HRM获得与桃Tssd紧密连锁的SNP标记

鲁振华，牛良，张南南，崔国朝，潘磊，曾文芳，王志强

（中国农业科学院郑州果树研究所/国家桃葡萄品种改良中心/农业部果树育种技术重点实验室，郑州 450009）

【目的】植物中，SNP标记具有分布广泛、分辨率高、共显性和多态性高等特点，是遗传研究的常用分子标记。桃全基因组测序完成，获得了大量SNP位点。利用现有的SNP数据进行简单、快速的SNP基因分型是基因定位、品种鉴定和图谱构建等后续研究的基础。文章拟建立采用高分辨率熔解曲线进行不同类型SNP的基因分型方法，以获得与桃温度敏感半矮生型基因紧密连锁的分子标记。【方法】以普通生长型（ST）单株97-32-46为母本，温度敏感半矮生型单株03-94-2（Tssd）为父本进行人工杂交，利用其分离群体96个后代单株为研究材料。在定位目标基因的区间内开发连锁和不同类型的SNP标记的基础上，采用高分辨率熔解曲线进行SNP的基因分型并获得与目标性状紧密连锁的SNP标记。【结果】明确了DNA模板和Mg2+是影响基因分型的关键因子，并确立了反应体系最佳浓度区间。在15 µL反应体系中模板DNA的量低于5.0 ng时或Mg2+浓度低于1.6 µmol·L-1时则不能完成PCR扩增和基因分型；根据亲本基因型和表型一致的SNP位点设计引物，扩增片段长度在140 bp左右。高分辨率熔解曲线分析可对由单个核苷酸变异引起的4种不同类型的SNP（A/T、A/G、A/C和C/G）进行基因分型，并正确区分了温度敏感半矮生型和普通生长型，与进行Sanger测序鉴定的结果一致。……