李雅博，李婷，韩莹琰，范双喜

（北京农学院植物科学技术学院，北京 102206）

叶用莴苣热激蛋白基因LsHsp70-2711的克隆及高温胁迫下的功能分析

李雅博，李婷，韩莹琰，范双喜

（北京农学院植物科学技术学院，北京 102206）

【目的】通过克隆Hsp70相关基因，并利用VIGS分析叶用莴苣热胁迫下Hsp70表达量和形态变化，为解析热激蛋白基因Hsp70在高温胁迫下的响应机制及分子机理奠定基础。【方法】通过同源克隆及RACE技术，获得叶用莴苣热激蛋白LsHsp70-2711的cDNA全长序列，利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析该基因在不同温度和不同高温时间下的叶用莴苣热敏品种‘P-S11’和耐热品种‘G-S59’的表达差异，确定基因和高温的相关性。根据VIGS技术，构建pTRV-LsHsp702711瞬时沉默载体，转化农杆菌GV1301，注射法侵染叶用莴苣叶片，三周后经PCR鉴定得到阳性植株。对照组和阳性组在基因表达和形态上进行对比，对照植株和阳性植株热胁迫和干旱处理后再次分析LsHsp70-2711的表达特性，观测形态变化。【结果】LsHsp70-2711 cDNA全长为2 226 bp，开放阅读框为2 154 bp，编码718个氨基酸，与拟南芥（NP_187864.1）、番茄（NP_001266213.1）、水母雪莲花（AAB99745.1）等物种的Hsp70同源性达到80%以上，证明此基因属于Hsp70家族。根据qRT-PCR结果，高温胁迫下该基因在两个品种中的表达均上调，在耐热品种中总体表达水平均高于热敏品种，耐热品种LsHsp70-2711的表达量最大值出现在42℃、60 min，37℃、60 min时热敏品种基因表达量达最大值，且在42℃高温下热敏品种‘P-S11’中基因表达随着胁迫时间的增加受到抑制，而耐热品种‘G-S59’则能长时间保持较高的表达水平，此结果和田间两品种间耐热差异表现相符合。亚细胞定位显示，LsHsp70-2711主要在细胞质中。……