田园，倪琪，彭奕冰

上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科，上海 200025

·论著·

Pdr1蛋白N端携带Flag标签的光滑假丝酵母的构建

田园，倪琪，彭奕冰

上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科，上海 200025

近年来，光滑假丝酵母已成为第二位引起侵袭性真菌感染的病原体。光滑假丝酵母对唑类药物(临床一线抗真菌药物)的敏感性低且易发生耐药，一直是研究的热点。介导光滑假丝酵母对唑类药物耐药的关键基因是转录因子pdr1，其功能性突变会使Pdr1蛋白功能过度活跃，导致下游唑类药物外排泵基因高表达，从而对唑类药物耐药。本研究利用同源重组技术，构建在基因pdr1的5′端定点插入3×Flag标签的重组菌株2a2和2b2，为后续利用免疫染色质共沉淀技术寻找Pdr1直接调控基因奠定基础。结果表明，3×Flag标签添加到Pdr1蛋白N端可成功表达Flag-Pdr1蛋白；与野生型菌株相比，表达Flag-Pdr1的菌株对氟康唑的耐药性增强。此外，与野生型菌株相比，表达Flag-Pdr1的菌株中cdr1和pup1基因表达水平显著上升，提示在Pdr1蛋白N端加Flag标签能使其功能活跃，表明N端对Pdr1蛋白功能具有重要意义。

光滑假丝酵母；pdr1基因；标签；基因敲除；耐药性

流行病学研究显示，近年来光滑假丝酵母(Candidaglabrata，C.glabrata)已成为第二大引起侵袭性真菌感染的病原体，其血流感染的病死率接近50%[1-3]。光滑假丝酵母感染流行的重要原因是其易对唑类药物耐药，而唑类药物是临床主要抗真菌药物。既往研究表明，光滑假丝酵母的唑类药物获得性耐药机制主要有两种[4-5]，一种是光滑……