郭佳慧，文荣，王玉燕，张浩旸，刘红，徐娅佳，叶荣

复旦大学基础医学院病原生物学系，上海 200032

·论著·

鼠冠状病毒核衣壳蛋白的抗体制备与抗原决定簇分析

郭佳慧，文荣，王玉燕，张浩旸，刘红，徐娅佳，叶荣

复旦大学基础医学院病原生物学系，上海 200032

核衣壳(nucleocapsid，N)蛋白有稳定病毒基因组、调控病毒复制及细胞状态的特殊作用。鼠肝炎病毒(murine hepatitis virus，MHV)为乙型冠状病毒属的原型病毒，是研究冠状病毒N蛋白功能的经典模型。本研究用去污剂处理鼠冠状病毒粒子暴露N蛋白，另用原核表达纯化的重组N蛋白分别免疫小鼠，制备多克隆及单克隆抗体。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)和蛋白免疫印迹分析结果显示两类抗体均具有高灵敏度和特异度，与甲型冠状病毒猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus，TGEV)的N蛋白无交叉反应。原核表达缺失突变的N蛋白分析结果显示，多克隆抗体与单克隆抗体2E6识别的鼠冠状病毒N蛋白抗原决定簇完全一致，位于N端结构域(N-terminal domain，NTD)C端与SR之间的58个氨基酸残基内。此外，基于单克隆抗体2E6的ELISA及免疫荧光法能检测到感染细胞中和培养上清液中的N蛋白组分，且其含量与病毒复制的滴度一致。这些结果表明，鼠冠状病毒复制过程中粒子与细胞中的N蛋白可能维持相似的结构，使NTD与SR之间的部分氨基酸残基一直暴露在表面，从而形成了优势抗原决定簇。

鼠冠状病毒；核衣壳蛋白；抗体；抗原决定簇

冠状病毒(coronavirus，CoV)是一类有包膜的正链RNA病毒，属于套式病毒目(Nidovirales)，其基因组是目前已知最大的mRNA分子，约30 kb[1]。……